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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation de la souris
- Anesthésier la souris
- Préparez du pentobarbital sodique (50 mg/kg) dans une seringue.
- Saisissez la souris (mâle de 8 semaines C57BL/6) avec la main gauche de manière à ce que son ventre soit tourné vers le haut et que sa tête soit plus basse que sa queue. Désinfectez la peau abdominale avec de l’alcool à 75 %.
- En tenant la seringue dans la main droite, percez la ligne blanche de l'abdomen avec l'aiguille légèrement sur le côté droit de la peau de 3 à 5 mm. Assurez-vous que l'aiguille de la seringue et la peau sont à un angle de 45°, injectez lentement le pentobarbital dans la cavité abdominale. Après le rasage, désinfecte autour du site d'incision de la souris 3 fois en alternance avec une solution d'alcool à 75 % et de chlorhexidine.
- Vérifiez si l’anesthésie a réussi en raison de l’absence de réflexe de redressement.
- Injectez l’isothiocyanate-dextran de Rhodamine B dans la veine caudale.
- Préparez 100 μL d’isothiocyanate-dextran de rhodamine B à 10 mg/mL dans une seringue.
- Essuyez la queue de la souris avec de l'alcool à 75 %.
- Tenez la queue avec la main gauche, tenez la seringue dans la main droite avec l’aiguille parallèle à la veine et injectez le colorant de 100 μL.
- Arrêtez le saignement avec un coton-tige après l’injection.
- Trempez la fourrure abdominale de la souris avec de la gaze imbibée d'eau stérile et rasez l'abdomen de la souris à l'aide d'un rasoir, en faisant des mouvements dans le sens de la fourrure. Après le rasage, désinfecte autour du site d'incision de la souris 3 fois en alternance avec une solution d'alcool à 75 % et de chlorhexidine.
- Après avoir essuyé un coussin chauffant avec de l’alcool à 75 %, ouvrez le coussin chauffant et placez la souris sur le dos dans le coussin chauffant pour maintenir sa température corporelle à 37 °C.
2. Fixation du foie de souris avec le cadre d’imagerie des organes corporels
REMARQUE : Le cadre commercial d’imagerie d’organe n’a pas encore été publié.
- Placez une ventouse propre dans une position fixe.
- Installez un appareil d’imagerie d’organe (Figure 1) et essuyez le coussin chauffant et la ventouse avec de l’alcool à 75 %.
- Connectez la ventouse (5 mm de diamètre) au tuyau de la pompe à vide et allumez la pompe à vide.
- Sur une table stérile stérilisée avec de l'alcool à 75 %, désinfecte autour du site d'incision de la souris 3 fois en alternance avec une solution d'alcool à 75 % et de chlorhexidine, puis désinfecte autour du site d'incision de la souris 3 fois en alternance avec de l'alcool à 75 % et une solution de chlorhexidine, puis utilise des ciseaux chirurgicaux pour couper 2 cm de peau du bord sternal inférieur de la souris et exposer le foie.
- Placez la souris avec le coussin chauffant sur la base du support.
- Ajustez le dispositif d’imagerie d’organe de manière à ce que la ventouse retienne le foie. Utilisez ensuite une pression négative de 30 à 35 kPa pour l’aspiration afin que le foie se fixe à la ventouse (Figure 2).
3. Réglage du microscope à balayage laser multiphotonique
- Allumez le microscope multiphotonique et sélectionnez l’objectif 60x/1,00 W.
- Fixez le cadre et la souris sous l’objectif de l’objectif.
- Ajoutez une goutte de solution saline normale qui peut couvrir toute la lentille, qui est le centre de la ventouse, et ajustez la lentille de l’objectif pour qu’elle ne touche que la solution saline normale.
- Double-cliquez sur l’icône de l’ordinateur pour allumer le logiciel laser et allumer l’interrupteur. Appuyez ensuite sur le bouton d’alimentation et l’obturateur et maintenez-les enfoncés pendant 3 secondes.
- Réglez la longueur d’onde sur 800 nm.
- Démarrez le logiciel d’exploitation du microscope à l’aide de l’ordinateur.
- Pour le réglage d’acquisition, réglez Laser 800.