$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Laparotomie
- Anesthésier les animaux avec de la xylazine (10 mg/kg) et une solution de kétamine (80 mg/kg), par voie sous-cutanée (0,1 mL/10 g de poids corporel) à l’aide d’une seringue de 1 mL et de 13 aiguilles de 0,45 mm 26 G 1/2. Vérifiez que la profondeur de l’anesthésie est suffisante en pinçant l’orteil. Contrôlez la température corporelle à l’aide de coussinets chauffants. Assurez-vous que tout le matériel chirurgical est stérile.
- Nettoyez la région abdominale avec une solution de povidone iodée à 5 % et utilisez une tondeuse pour enlever les poils entre la poitrine et le bas-ventre (environ 2cm2). Nettoyez la zone chirurgicale avec de l’alcool à 70 %.
- Immobilisez l’animal sur la planche chirurgicale à l’aide de ruban chirurgical. À l’aide de ciseaux, coupez 5 mm de la peau horizontalement, sur la partie supérieure de l’abdomen et 1 cm en dessous de l’apophyse xiphoïde. Répétez la coupe sur le péritoine. Cela se traduira par une laparotomie avec une exposition minimale de la cavité.
2. Localisation et exposition du pancréas
- À l'aide d'un écarteur, tirez le foie vers la tête de la souris, à ~1 cm de l'intestin.
- Localisez la région du pancréas à laquelle on injectera du taurocholate de sodium (tête du pancréas). Localisez le duodénum par rapport au foie, sous le foie, sur le côté droit (à gauche lorsque la souris est vue). Le duodénum est la première partie de l’intestin grêle et est relié à la dernière partie de l’estomac.
- À l’aide d’une pince, soulevez le foie vers la tête de l’animal et tirez doucement sur la partie de l’intestin grêle. Fixez les deux extrémités latérales de l’intestin grêle à l’aide d’une suture en polypropylène 6-0 pour mieux voir la partie distale du canal cholédoque.
3. Induction de la pancréatite aiguë sévère
- Occlure temporairement le canal cholédoque proximal à l’aide d’un clip de microvaisseau pour empêcher la perfusion rétrograde de s’écouler dans le foie. Le canal cholédoque peut être vu du côté hépatique du duodénum et sa jonction avec le duodénum apparaîtra blanche. Exposez l’organe hors de la cavité abdominale.
- Perforez la région péri-ampullaire (partie blanchâtre de la paroi de l'intestin grêle) pour accéder au canal cholédoque à l'aide d'une aiguille de 0,4 mm reliée à un tube de polyéthylène de 0,54 mm.
- Faites une occlusion temporaire du canal cholédoque distal avec 8-0 suture pour empêcher la solution de taurocholate de sodium de s’écouler dans le duodénum.
- Démarrer la pompe à perfusion et programmer une perfusion de taurocholate de sodium à 2,5 % (diluée dans une solution saline à 0,9 %) à une vitesse constante de 10 μL/10 g de poids corporel pendant 3 min.
- Après la perfusion, retirez le clip du microvaisseau, le 8-0 temporaire suture, et l’aiguille d’injection du canal pancréatique biliaire pour reconstituer le flux physiologique de la bile.
- À la fin, suturez l’abdomen avec une suture en polypropylène monofilament non absorbant 6-0. Le temps entre la laparotomie et la suture finale doit être de 30 minutes maximum (voir Figure 1).
- Après l’opération, logez les animaux dans des boîtes en polyéthylène garnies de copeaux de bois et d’eau et de nourriture à volonté.
- Traitez les souris témoins de la même manière que les souris expérimentales, mais assurez-vous que l’infusat est composé uniquement de solution saline. Effectuez l’intervention chirurgicale et la perfusion d’une solution saline (10 ml/min, pendant 3 min) dans un groupe témoin (SHAM) afin d’éliminer le biais inflammatoire causé par la chirurgie et la canulation.
- Utilisez le tramadol 12,5 mg/kg par voie sous-cutanée toutes les 8 heures, en commençant après la récupération post-chirurgicale.