Prélèvement prénatal d’embryons de souris : une procédure pour prélever des embryons sur une souris enceinte

Résumé

Source : Yun, K. Évaluation des défauts d’obstruction des jonctions urinaires par injection de colorant bleu de méthylène. J. Vis. Exp.(2017)

Cette vidéo montre le prélèvement d’embryons sur une souris enceinte. Les embryons périnataux récupérés peuvent être utilisés comme systèmes modèles pour l’étude du développement des mammifères.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Dissection d’embryons prénataux

1. Nettoyez les ciseaux et les pinces de dissection avec de l’éthanol à 70 %.
2. Pour prélever des embryons périnataux à E18.5 ou E19.5, euthanasiez d’abord les souris enceintes en utilisant l’inhalation de CO₂, puis effectuez une luxation cervicale conformément aux directives éthiques.
   note: La souris femelle enceinte donne généralement naissance à partir de E18.5, cependant, les reins plus gros sont plus faciles à manipuler. Par conséquent, les reins à E19.5 plus proches de la naissance sont plus faciles à analyser. Cependant, les chiots présentant des obstructions bilatérales des voies urinaires meurent après la naissance. En fonction des caractéristiques des souris expérimentales, un jour/une heure de collecte appropriés doivent être déterminés empiriquement.
3. Vaporisez de l’éthanol à 70 % sur la surface abdominale ventrale, puis ouvrez la cavité abdominale ventralement à l’aide de ciseaux de dissection et de pinces.
4. Soulevez tout l’utérus et séparez-le du corps en coupant avec des ciseaux de dissection à l’extrémité des cornes utérines.
5. Rincez tout l’utérus avec 1x PBS dans une boîte de Pétri.
6. Coupez l’utérus segmentairement avec des ciseaux de dissection et retirez les déciduus placentaires avec une pince à dissection pour exposer les embryons dans les sacs vitellins.
7. Retirez d’abord le sac vitellin, puis retirez la membrane amniotique à l’aide d’une pince à dissection pour libérer les embryons périnataux.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Ciseaux opératoires délicats	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-6702
Micro pince à dissection	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5135
Pince à épiler Dumont ; Motif #5	Roboz Surgical Instrument Co.	RS-5045
Quality Biological Inc. SALINE NORMALE - 500ML	Fisherscientific	Tél. : 50-983-204