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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation de l’animal
- Injecter un analgésique 30 minutes avant l’intervention chirurgicale (4 mg/kg de carprofène et 0,1 mg/kg de buprénorphine).
- Enregistrer le poids corporel de la souris pour ajuster la dose de Rose Bengal à injecter (10 μL/g soit 100 μg/g).
- Placez la souris dans la chambre d’induction avec un débit d’isoflurane de 4 % pour l’anesthésier jusqu’à ce que le mouvement spontané du corps et des vibrisses cesse.
- Transférez la souris dans le cadre stéréotaxique et placez-la en position couchée avec son nez dans le masque d’anesthésie. Fixer l’animal et maintenir la concentration d’isoflurane à 4 % pendant 1 min. Réduire et maintenir ensuite la concentration d’isoflurane à 2 %.
- Insérez doucement la sonde rectale pour surveiller la température tout au long des procédures chirurgicales. Réglez le coussin chauffant associé contrôlé par rétroaction pour maintenir la température du corps de la souris à 37 °C.
- Appliquez la pommade oculaire au dexpanthénol sur les deux yeux et nettoyez la peau et la fourrure environnante avec un agent désinfectant.
2. Modèle de photothrombose
- Faites une incision longitudinale de 2,0 à 2,5 cm et rétractez-la pour exposer le crâne. Effectuez l’exposition du crâne avec une seule incision pour éviter les complications de la plaie.
- Retirez délicatement le périoste avec un coton et identifiez les sutures coronales.
- Mettez les lunettes de protection, allumez le laser 561 nm et marquez le bregma +3 mm à gauche.
- Éteignez le laser, fixez un autocollant avec un trou de 4 mm de diamètre placé aux coordonnées marquées mentionnées ci-dessus.
- Injectez à la souris de la rose du Bengale (10 μL/g), par voie intrapéritonéale. Placez le faisceau laser à 4-5 cm du crâne, allumez le laser 561 nm et illuminez le crâne pendant 20 min.
- Appliquez deux gouttes de solution saline à 0,9 % sur le crâne pour le réhydrater, suturez la plaie et placez l’animal dans une chambre de récupération à 37 °C pour récupérer de l’anesthésie. Après 1 h, remettez les souris dans leurs cages dans une pièce à température contrôlée.
- Injecter un analgésique toutes les 12 h pendant 3 jours après la chirurgie (4 mg/kg de carprofène et 0,1 mg/kg de buprénorphine).