1. Transplantation d’îlots
- Induire et maintenir la souris sous anesthésie générale avec de l’isoflurane à 2 %. Vérifiez l’absence de réflexes de pédale pour assurer une bonne anesthésie de l’animal.
- Rasez et enlevez la fourrure dans la région de l’abdomen de la souris.
- Administrer une dose unique de buprénorphine avant l’opération (0,1 mg/kg i.p.).
- Désinfectez la zone chirurgicale avec trois lingettes alternées à 2 % d’iode et d’alcool à 75 %.
- Effectuez une laparotomie avec des micro-ciseaux pour générer une incision de 1 à 1,5 cm.
- Ouvrez la cavité péritonéale à l’aide d’un écarteur. Poursuivez avec la méthode A ou la méthode B comme indiqué ci-dessous.
Méthode A : (arrêter le saignement avec de la mousse de gel, Figure 1A)
- Préparation de la souris
- Placez une gaze stérile autour de l’incision.
- Retirez doucement l’intestin à l’aide d’une pince et maintenez-le sur la gaze.
- Identifiez la veine porte par son emplacement et exposez-la bien.
- Couvrez l’intestin avec une gaze chaude et humide pendant toute la durée de l’opération.
- Insérez l’aiguille de la seringue à insuline préchargée dans la veine porte près du duodénum (figure 1B). Pour ce faire, tenez l'aiguille avec le trou (biseau) vers le bas et positionnez l'angle de la surface d'ouverture parallèlement à la paroi de la veine porte avant de pénétrer à travers la paroi.
- Tirez sur le piston pour aspirer un peu de sang (20-50 μL) dans la seringue afin de mélanger d’abord les îlots.
- Infusez lentement les îlots dans la veine porte tout en tirant et en poussant le plongeon à plusieurs reprises.
- Placez un morceau de mousse de gel (d’environ 0,5 cm x 0,5 cm) pour couvrir le site d’injection.
- Appuyez sur la mousse de gel avec un coton-tige tout en retirant l’aiguille de la veine porte.
- Continuez à appuyer sur le gel pendant environ 2 minutes pour confirmer qu’il n’y a pas de saignement actif.
- Retournez l’embout en coton et éloignez-le de la mousse de gel pour vous assurer que la mousse de gel couvre bien la veine porte.
Méthode B : (arrêter le saignement avec un coussinet adipeux, Figure 1C)
- Exposez soigneusement la veine porte.
- Utilisez deux cotons-tiges pour maintenir la veine porte exposée des côtés gauche et droit.
- Identifiez le coussinet adipeux entre le duodénum et la veine porte.
- Pénétrez à travers le coussinet adipeux avant d’insérer l’aiguille dans la veine porte (Figure 1D).
- Perfusez les îlots, en suivant la procédure similaire décrite ci-dessus dans la méthode A.
- Retirez l’aiguille tout en appuyant sur la graisse à l’aide d’un coton-tige.
- Continuez à appuyer sur le coussinet adipeux pendant 1 minute après avoir retiré l’aiguille.
- Après avoir confirmé qu’il n’y a pas de saignement de la veine porte, ramenez doucement l’intestin dans la cavité péritonéale dans sa position d’origine.
- Laisser 0,5 mL de solution saline chaude (36-37 °C) dans la cavité abdominale avant la fermeture.
note: Une solution saline chaude facilite le mouvement et la récupération de l’intestin après la chirurgie et prévient la nécrose intestinale.
- Fermez la couche musculaire avec une suture 5-0.
- Fermez la couche de peau avec une suture 4-0.
- Placez la souris dans une cage propre sur un coussin chauffant jusqu’à ce qu’elle soit complètement rétablie de l’anesthésie.
- Continuer de fournir un analgésique (p. ex. buprénorphine 0,1 mg/kg i.p.) toutes les 12 h et une chaleur supplémentaire pendant 48 h après la chirurgie.
REMARQUE : La procédure de transplantation d’îlots prend environ 15 à 20 minutes.
