Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Dissection du nœud sino-auriculaire (SAN)
- Préparez la solution Complete Tyrode héparinée pour la dissection SAN.
- Ajouter 400 μL d'héparine (1 000 USP/mL) à 40 mL de solution Complete Tyrode et réchauffer dans un bain-marie à 37 °C.
- Injectez à la souris par voie intrapéritonéale 200 à 300 μL d’héparine (1000 USP/mL) et laissez l’animal reposer pendant 10 min.
- Euthanasier la souris héparinée par surdosage d’isoflurane.
- Placez la souris dans une petite chambre en verre contenant des vapeurs d’isoflurane générées par l’ajout de 200 à 300 μL d’isoflurane liquide à un papier filtre à l’intérieur d’un tube en plastique perforé.
REMARQUE : Étant donné que l’isoflurane peut provoquer une irritation de la peau et peut également être absorbé par la peau, le liquide ne doit pas entrer en contact direct avec la souris. Par conséquent, la lingette imbibée d’isoflurane est placée dans un tube perforé pour l’administration.
- Vérifier la mort par l’arrêt du mouvement et de l’effort respiratoire et par l’absence de réflexe de pincement de l’orteil. La mort prend généralement environ 1 à 2 minutes après le placement dans la chambre.
note: La mort s’accompagne généralement de la miction.
- Placez la souris en position couchée sur une planche de dissection, les pattes tendues, et fixez les pattes à la planche à l’aide d’aiguilles de seringue de calibre 23 de 1 pouce de long. Ensuite, retirez la fourrure à proximité du bas de la cage thoracique à l’aide de ciseaux chirurgicaux et en coupant la fourrure à la racine.
note: Pour une planche de dissection, des couvercles de refroidisseur en polystyrène peuvent être utilisés.
- Tout en tenant la peau avec un hémostat, utilisez des ciseaux chirurgicaux pour faire une incision transversale dans la peau juste sous le bas de la cage thoracique, à partir de l’arc costal gauche jusqu’à l’arc costal droit (Figure 1A).
- Ouvrez le péritoine avec des ciseaux chirurgicaux et séparez soigneusement le foie du diaphragme, en prenant soin de ne pas entailler le foie, ce qui provoquerait des saignements excessifs (Figure 1B). Inciser le diaphragme le long du thorax pour exposer la cavité thoracique (Figure 1C-D).
- À l’aide de ciseaux chirurgicaux, coupez les parois latérales de la cage thoracique des bords des arcs costaux jusqu’aux clavicules pour exposer le cœur, en prenant soin de ne pas endommager le cœur (Figure 1D). Ensuite, utilisez une aiguille de seringue de calibre 23 pour épingler la cage thoracique sur l’épaule, en la maintenant en place et à l’écart du champ opératoire.
- À l'aide d'une pipette de transfert, versez la solution héparinée de Complete Tyrode sur le cœur pour le maintenir humide
note: Ne laissez pas le cœur se dessécher.
- Retirez les poumons en les tenant à l’aide d’une pince Graefe extra fine et en sectionnant la trachée avec des ciseaux chirurgicaux (Figure 1E).
- Tenez l’apex du cœur à l’aide d’une pince Graefe extra fine et retirez-le en coupant l’aorte et les veines caves avec des ciseaux chirurgicaux. Transférez le cœur dans une boîte de Pétri contenant de l'élastomère de silicone durci (Figure 2A) et utilisez une pipette de transfert pour baigner le cœur avec 2-3 ml de solution Complete Tyrode héparinée tiède (37 °C).
note: Veillez à ne pas endommager la paroi postérieure délicate des oreillettes droites, qui contiennent le SAN, et les veines auriculaires droites connectées. Baigner le cœur avec la solution Complete Tyrode empêche le cœur de se dessécher, mais ne plongez pas complètement le cœur dans la solution car cela nuirait à la visibilité pendant la dissection.
- Orientez le cœur avec l'oreillette droite à la droite de l'expérimentateur et l'oreillette gauche à gauche de l'expérimentateur.
note: La dissection du tissu SAN doit être effectuée rapidement afin d’éviter les lésions liées à l’ischémie.
- Fixez l’apex du cœur au plat à l’aide d’une goupille de dissection. Ensuite, tout en tenant la veine cave inférieure à l’aide d’une pince de laminectomie Dumont #2, insérez une aiguille de seringue de 22 G à travers la veine cave inférieure et supérieure pour localiser leur position dans l’oreillette droite, ce qui permet également d’identifier la position approximative du SAN (situé dans la partie de tissu entre la veine cave inférieure et la veine cave supérieure (Figure 2B).
- À l’aide de petites broches de dissection, épinglez les appendices auriculaires gauche et droit à la boîte.
- Tout en tenant l’appendice auriculaire gauche à l’aide d’une pince à laminectomie Dumont #2, placez une goupille de dissection à travers l’appendice auriculaire gauche pour le maintenir en place.
- Tout en tenant l’appendice auriculaire droit à l’aide d’une pince Dumont #55, placez une goupille de dissection à travers l’appendice auriculaire droit pour le maintenir en place.
note: Le même type de pince peut être utilisé pour tenir les appendices auriculaires gauche et droit si vous le souhaitez.
- Retirez l’aiguille de la seringue qui enjambe les veines cavaes.
- Pour évacuer le sang du cœur, utilisez des ciseaux Castroviejo pour retirer l’apex du cœur (c’est-à-dire la moitié inférieure) en pratiquant une incision transversale à travers les ventricules (Figure 2C). Ensuite, laver le cœur en ajoutant de la solution Complete Tyrode héparinée tiède (37 °C) à l'aide d'une pipette de transfert.
- Utilisez des ciseaux Castroviejo pour couper le long du septum auriculo-ventriculaire, en gardant l’incision plus près du ventricule que des oreillettes. Continuez à couper le long de la cloison auriculo-ventriculaire jusqu’à ce que les oreillettes soient séparées des ventricules.
- Coupez le long du septum interauriculaire pour enlever l’oreillette gauche.
- Placez des broches de dissection à la périphérie de l’oreillette droite pour qu’elle soit à plat (Figure 2D). Retirez toute graisse, vaisseaux ou tissus restants de l’oreillette à l’aide des ciseaux Castroviejo.
- Localisez le SAN dans l’oreillette droite, qui, dans cette orientation, est approximativement bordée par la veine cave supérieure (en haut), la veine cave inférieure (en bas) et la crête terminale (à gauche) (Figure 2D).
REMARQUE : La crête terminale se présente sous la forme d’une crête musculaire sombre entre l’appendice auriculaire droit et le SAN. Souvent, l’artère SAN peut également être vue traverser le SAN (Figure 2D).
