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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Chirurgie et pose de l’anneau crânien
REMARQUE : Le support complet pour l’installation de la souris comprend 4 pièces, un bloc et une plaque, l’anneau pour maintenir la tête de la souris et une vis pour fixer l’anneau au bloc (Figure 1A). Tous les éléments du support ont été obtenus à partir de i.materialise.com par impression 3D. La plaque est faite d’un polymère d’acrylonitrile butadiène styrène (ABS), le bloc et la vis d’acier inoxydable, et l’anneau d’acier inoxydable de haute qualité (acier inoxydable très détaillé) (voir la figure 2 pour les dimensions et les matériaux des fichiers d’impression 3D). Le bloc est fixé de manière permanente au support, soit vissé, soit collé. Une fois l’anneau fixé sur le crâne de la souris, il doit être vissé au support de bloc (Figure 1A).
- Humidifiez les cheveux du cuir chevelu avec une serviette en papier imbibée d’éthanol à 70 % pour la désinfection. Enlevez tous les cheveux morts avec une serviette en papier humide.
note: Pour plus de commodité, le cuir chevelu peut être rasé avant la chirurgie.
- Incisez le cuir chevelu en formant un T sur la ligne médiane jusqu’à 1 cm et entre les oreilles pour exposer le calvarium à l’aide de ciseaux fins stériles et d’une pince à épiler.
note: L’anneau sera positionné de manière à chevaucher les os frontaux et pariétaux (Figure 1B).
- Utilisez une pince à épiler stérile pour exposer le crâne. Retirez délicatement le périoste à l’aide de ciseaux et d’une pince à épiler. À l’aide d’un coton-tige stérile imbibé de solution saline physiologique, on enlève tout le périoste et tous les débris ou cheveux qui pourraient altérer l’imagerie.
note: Pour limiter les réactions inflammatoires, faites très attention à ne pas endommager l’os.
- Enlevez toute trace de sang en rinçant avec une solution saline et séchez rapidement l’os avec un coton-tige sec. Appliquez le gel de colle sur l’anneau, positionnez-le sur l’os exposé, et maintenez-le pendant quelques secondes afin que l’anneau soit fermement fixé au crâne.
note: Aucune colle ne doit pénétrer dans le champ d’observation car elle pourrait entraîner une autofluorescence indésirable.
- Humidifiez légèrement le crâne à l’aide d’un coton-tige immergé dans une solution saline physiologique.
- Préparez la pâte dentaire au silicone en mélangeant soigneusement les composants bleus et jaunes 1:1. Appliquez du pâte dentaire tout autour de l’anneau pour l’étanchéité afin d’éviter les fuites pendant l’imagerie. Retirez soigneusement toute pâte dentaire ou colle qui aurait pu pénétrer dans l’anneau.
- Remplissez l’anneau de solution saline et vérifiez qu’il n’y a pas de fuite.
note: La solution saline sert de milieu d’immersion pour l’objectif du microscope. Les saignements peuvent être plus critiques lors de l’utilisation de souris présentant des défauts liés à l’hémostase. Il est essentiel d’empêcher le sang de pénétrer dans l’anneau car cela pourrait brouiller l’imagerie.
- Placez la souris sur le support et vissez l’anneau sur le support de bloc (Figure 1C). Placez des compresses pliées sous la tête de l'animal pour relever la tête et éviter le détachement de l'anneau du crâne.
note: La tête est directement fixée de manière à empêcher les mouvements de l’image dus à la respiration.
- Placez le support et la souris dans la chambre de microscope chauffée (Figure 1D).
REMARQUE : Veillez à ne pas déloger le cathéter inséré à tout moment.
