Installation d’une fenêtre d’imagerie intravitale pancréatique dans un modèle de souris : une fenêtre d’imagerie pancréatique intégrée pour l’imagerie in vivo en accéléré de la microstructure du pancréas murin

Résumé

Source : Park, I. et. al. Visualisation longitudinale stabilisée in vivo au niveau cellulaire du pancréas dans un modèle murin avec une fenêtre d’imagerie intravitale pancréatique. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo montre la procédure d’implantation d’une fenêtre d’imagerie pancréatique pour séparer le pancréas des intestins pour une imagerie longitudinale à haute résolution de la microstructure du pancréas.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Chirurgie

1. Préparez une plate-forme chirurgicale stérile et stérilisez les surfaces avec de l’éthanol à 70 %.
   note: Pour les séances d’imagerie longitudinale, la technique aseptique est indispensable.
2. Anesthésier les souris avec un mélange de tilétamine/zolazépam (30 mg/kg) et de xylazine (10 mg/kg).
   note: L’utilisation de tilétamine/zolazépam est recommandée à la place de la kétamine en raison de son effet indésirable d’hyperglycémie. L’anesthésie optimale doit être sélectionnée pour les besoins de l’expérience.
3. Surveillez la température corporelle à l’aide d’une sonde rectale avec un coussin chauffant contrôlé par homéotherme.
4. Rasez le flanc gauche de la souris et appliquez trois tours de gommage à base d’alcool et d’iode.
   note: Si une crème dépilatoire est utilisée, ne laissez pas plus de 1 minute pour éviter les brûlures chimiques.
5. Faites une incision de 1,5 cm sur le flanc gauche de la souris et disséquez la peau et le muscle.
6. Effectuez une suture avec un cordon de bourse avec une suture 4-0 noire ou en nylon dans la marge d’incision.
7. Utilisez un micro-écarteur sur l’incision et exposez doucement la rate.
8. Accumulez soigneusement la rate à l’aide d’une pince à anneau et identifiez le pancréas.
9. Placez la fenêtre sur le flanc de la souris et passez la rate et le pancréas à travers l’espace ouvert de la fenêtre. La manipulation du pancréas doit être très douce car elle peut provoquer des saignements ou une pancréatite.
   note: Concevoir sur mesure la fenêtre d’imagerie intravitale pancréatique pour isoler le pancréas de l’intestin dans la cavité abdominale (Figure 1A, B).
10. Placez délicatement le pancréas sur la plaque de la fenêtre d’imagerie, la rate sera placée sur l’espace ouvert de la fenêtre.
11. Appliquez des gouttes de colle cyanoacrylate N-butyle sur le bord de la fenêtre d’imagerie.
    1. Pour minimiser la quantité de colle appliquée, utilisez une aiguille de cathéter de 31 G pour l’application. Si la quantité de goutte est importante, le tissu adhérera involontairement à la fenêtre ou au verre de couverture.
12. Appliquez délicatement un verre de protection rond de 12 mm sur le bord de la fenêtre d’imagerie.
13. Tirez la boucle de suture pour l’insérer dans la rainure latérale de la fenêtre et attachez-la trois fois.
14. Coupez le site proximal maximal du nœud pour éviter l’interruption des points de suture serrés lorsque ces souris sont éveillées.
15. Laissez les souris se remettre de l’anesthésie (2-3 heures) et injectez du kétoprofène (5 mg/kg, sous-cutané dans la peau lâche à la base du cou ou de la hanche de l’animal) pour soulager la douleur. Réévaluez l’apparition de signes de douleur toutes les 12 heures et le kétoprofène doit être envisagé toutes les 24 heures pendant 1 à 3 jours.
    note: L’analgésie influence la sécrétion d’insuline en réponse au glucose. Le choix et le moment de l’analgésie doivent être individualisés en fonction de l’objectif expérimental.
16. Hébergez la souris dans la cage avec une litière suffisante pour éviter le contact de la fenêtre avec la cage. Évitez de loger la maison avec les souris sans la chirurgie des fenêtres.

Résultats

Graphique 1. Conception et photographie de la fenêtre d’imagerie intravitale pancréatique. (A) Une vue 3D et en coupe transversale de la fenêtre d’imagerie intravitale pancréatique. (B) Photographie antérieure et postérieure de la fenêtre d’imagerie pancréatique.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Verres de couverture circulaires	Marienfeld	Référence 111520	Verre de protection pour fenêtre d’imagerie pancréatique
Ciseaux IRIS	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Référence S-1107-10	Ce produit peut être remplacé par le produit d’une autre société
Loctite 401	Henkel	401	Colle cyanoacrylate N-butyle
Micro porte-aiguille	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	N° H-1126-10	Ce produit peut être remplacé par le produit d’une autre société
Micro rapporteur	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	Référence 17004-03	Ce produit peut être remplacé par le produit d’une autre société
Micropinces	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1034	Ce produit peut être remplacé par le produit d’une autre société
Nylon 4-0	AILEE	Réf. NB434	Suture non résorbable
Omnican N 100 30G	B BRAUN	FT9172220S	Pour le cathéter vasculaire, utilisez uniquement la partie de l’aiguille
Fenêtre d’imagerie pancréatique	Geumto Engineering	Commande personnalisée	Fenêtre d’imagerie pancréatique - commande personnalisée
Physiosuite	Kent Scientific	PS-02	Régulateur de température homéothermique
Pince à anneau	JEUNGDO BIO & PLANT CO, LTD	F-1090-3	Ce produit peut être remplacé par le produit d’une autre société
Rompun	Bayer	Rompun	Agent anesthésique
Zoletil	Virbac	Zoletil 100	Agent anesthésique
BALB/C Nu	OrientBio	BALB/C Nu	BALB/C Nu