Extraction de la cupule rétinienne de la souris : une intervention chirurgicale pour obtenir une cupule rétinienne intacte de l’œil de la souris

Résumé

Source : Jiang, K. et al. Détermination de la respiration mitochondriale et de la glycolyse dans des échantillons de tissu rétinien ex vivo. J. Vis. Exp (2021)

Cette vidéo décrit un protocole permettant d’isoler la cupule rétinienne sans les couches externes du globe oculaire d’une souris. Le tissu rétinien extrait peut aider à étudier diverses voies métaboliques se produisant dans les cellules rétiniennes.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Dissection de la cupule rétinienne

1. Euthanasier une souris par asphyxie au CO₂ conformément aux directives institutionnelles sur l’euthanasie.
   note: Ne laissez pas l’animal dans une chambre de CO₂ plus longtemps que le temps nécessaire à l’euthanasie.
2. Énucléez les yeux et placez-les dans un tampon PBS vieux comme de la glace dans une boîte de Pétri, puis placez-le sous un microscope de dissection.
3. Retirez soigneusement, en coupant avec des microciseaux, les muscles droits supplémentaires attachés à l’extérieur du globe oculaire et coupez le nerf optique.
4. À l’aide d’une aiguille de 30 G, percez un trou au bord de la cornée (limbe), qui sert de site d’insertion pour les microciseaux. Ensuite, à l’aide d’un microciseau à dissection fine, faites une coupe circulaire le long du bord de la cornée, en la séparant de l’œilleton postérieur.
5. À l’aide d’une pince à dissection tranchante, retirez la cornée, le cristallin et l’humeur vitrée de l’œilleton.
6. Utilisez des microciseaux à dissection fine pour faire plusieurs petites entailles sur la couche sclérale au bord de l’œilleton. Évitez de couper la couche de rétine. Utilisez deux pinces de dissection pointues pour tenir le tissu scléral de chaque côté de la coupure et tirez très soigneusement sur la couche sclérale pour la retirer de la rétine neurale. Répétez cette opération autour de l’œilleton jusqu’à ce que toute la sclérotique soit retirée et qu’une cupule rétinienne intacte soit obtenue.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
1 fois le PBS	Thermo Fisher	Référence 14190 à 144
Aiguille de calibre 30	Glisse de précision BD	305106
Perforateur de biopsie, 1 mm	Integra Miltex	33 à 31AA
Chambre d’asphyxie au CO2
Pince à dissection-Dumont #5	Outils scientifiques fins	Référence 11251-10	Pointe droite
Pince à dissection-Dumont #7	Outils scientifiques fins	Référence 11274-20	Pointe incurvée
Microscope de dissection
Pince Graefe	Outils scientifiques fins	Référence 11051-10	Pointe incurvée et dentelée
Microciseaux	Outils scientifiques fins	Référence 15004-08	Pointe incurvée