Collection de dépôts adipeux blancs et bruns chez un bébé souris : une intervention chirurgicale pour récolter le tissu adipeux blanc et le tissu adipeux brun chez le bébé souris

Dans cet article

Résumé

Source : Galmozzi, A. et al. Isolement et différenciation des préadipocytes primaires blancs et bruns de souris nouveau-nées. J. Vis. Exp. (2021)

Dans cette vidéo, nous montrons la procédure chirurgicale permettant d’isoler le tissu adipeux blanc sous-cutané et le tissu adipeux brun interscapulaire d’une souris nouveau-née.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Collecte et digestion des dépôts adipeux (jour 1)

Préparez deux tubes de 1,5 mL pour chaque petit : un pour le tissu adipeux brun (BAT) et un pour le tissu adipeux blanc (WAT). Ajouter 250 μL de solution saline tamponnée au phosphate (PBS) + 200 μL de tampon d’isolement 2x (123 mM de NaCl, 5 mM de KCl, 1,3 mM de CaCl₂, 5 mM de glucose, 100 mM d’acide 4-(2-hydroxyéthyl)-1-pipérazineéthanesulfonique (HEPES), de pénicilline-streptomycine et 4 % d’albumine sérique bovine exempte d’acides gras) dans chaque tube. Gardez les solutions stériles et sur de la glace.
Placez les petits dans de petites chambres (par exemple, un puits d’une plaque à 6 puits) et placez-les sur de la glace jusqu’à ce qu’ils deviennent hypothermiques. Assurez-vous qu’il n’y a pas de contact direct entre les chiots et la glace. Piquez une patte avec une pointe pour assurer la perte de conscience et euthanasiez les chiots par décapitation à l’aide de ciseaux tranchants.
REMARQUE : si vous travaillez avec différents génotypes, préparez un tube supplémentaire pour prélever une biopsie de la queue (coupe de 3 mm) pour le génotypage. Si le génotypage est effectué immédiatement, gardez les petits euthanasiés sur de la glace jusqu’à la dissection pour recueillir les dépôts adipeux.
Calculez et pesez la quantité de collagénase nécessaire pour digérer tous les dépôts. Ajouter 50 μL de collagénase de type I à 15 mg/mL dans 2 tampons d’isolement dans chaque tube. Ne pas remettre la collagénase en suspension dans le tampon d’isolement avant que tous les tissus n’aient été recueillis.
Pour recueillir le WAT sous-cutané, coupez la peau autour de l'abdomen du chiot (évitez la rupture péritonéale) et tirez doucement la peau vers le bas sous les pattes. Sans prélever la peau, prélevez soigneusement le dépôt de graisse, qui apparaîtra sous la forme d’un tissu mince et allongé clair (P1 ou plus jeune) ou blanc (P2 et plus ancien), attaché à l’intérieur ou au-dessus du quadriceps (Figure 1A, B). Rincez le dépôt de graisse dans du PBS et placez-le dans l’un des tubes contenant 250 μL de PBS + 200 μL de 2x tampon d’isolement. Garder sur la glace.
REMARQUE : Les souris P0 et P1 donnent le meilleur rendement. Chez les petits P0-1, le dépôt sous-cutané WAT est presque transparent. Chez les souris P2 et plus âgées, le dépôt est plus facile à identifier car il devient déjà blanc, indiquant la présence d’adipocytes blancs complètement matures et chargés de lipides.
Pour recueillir la MTD interscapulaire, tirez la peau des omoplates sur la tête. Soulevez le BAT - le tissu rouge profond entre les omoplates - et faites soigneusement des incisions tout autour pour le détacher du corps (Figure 1A, B). Vérifiez la consistance et la couleur ; rincer avec du PBS ; placez-le dans l’autre tube contenant 250 μL de PBS + 200 μL de 2x tampon d’isolement ; et keep on ice.
REMARQUE : Lors de la récolte de MTD sur des souris P2 et plus âgées, retirez soigneusement le tissu adipeux blanc entourant la MTD. Il se compose d’une mince feuille blanche et molle d’adipocytes située entre la peau et la MTD, qui est plus profonde entre les omoplates.

Accès restreint. Veuillez vous connecter ou commencer un essai pour afficher ce contenu.

Résultats

figure-results-1
Figure 1 : Collecte et traitement des coussinets adipeux. (A) Représentation schématique de l’isolement des adipocytes primaires blancs (en haut) et bruns (en bas). (B) Dépôts adipeux sous-cutanés blancs (en haut) et bruns (en bas). Chez les souris P0, le WAT sous-cutané est presque invisible, mais devient distinguable le ~jour 2 après la naissance. En revanch...