Résection apicale modèle de souris néonatale : une intervention chirurgicale pour amputer l’apex ventriculaire afin d’étudier le potentiel de régénération dans le cœur d’une souris nouveau-née

Résumé

Source : Li, Y. et al. Transplantation de macrophages cardiaques de souris néonatales chez des souris adultes. J. Vis. Exp. (2021).

Dans cette vidéo, nous montrons la procédure d’ablation chirurgicale de l’apex ventriculaire gauche d’un cœur de souris nouveau-né.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Opération de résection apicale chez une souris Cx3cr1 ^GFP/+ nouveau-née âgée de 1 jour (fond C57BL/6)

1. anesthésie
   1. Sortez tous les bébés souris des cages et mettez-les dans une boîte propre et sèche.
   2. Enfoncez chaque souris dans la glace pendant environ 2 à 3 minutes. Assurez-vous qu’il y a une fine barrière telle que du latex ou de la gaze entre la glace et le bébé souris pour éviter les engelures.
   3. Identifiez une anesthésie suffisante en observant les signes suivants : peau pâle, manque de mouvement des membres et absence de réflexe de pédale.
2. Thoracotomie
   1. Prérefroidissez la plate-forme d’opération en bronze pendant la nuit à -20 °C pour aider à maintenir l’anesthésie.
   2. Sortez la souris anesthésiée de la glacière et placez-la sur une plate-forme d’opération en bronze. Ancrez la souris sur la plate-forme d’exploitation en position couchée à l’aide d’un ruban adhésif médical.
   3. Placez la plate-forme d’exploitation avec la souris sous un stéréoscope.
   4. Désinfectez la poitrine de la souris à l’aide d’un tampon de préparation imbibé de bétadine et d’alcool à 70 % ou conformément à la politique de l’établissement.
   5. Incisez la peau avec une incision de 1 cm au niveau de la quatrième zone intercostale de la cavité thoracique, puis séparez les muscles intercostaux à l’aide de ciseaux microchirurgicaux jusqu’à ce que le cœur soit accessible.
   6. Appuyez alternativement sur la poitrine et l’abdomen à l’aide de deux pinces jusqu’à ce que le cœur soit extériorisé hors de la poitrine sans aucun dommage mécanique.
   7. Placez les côtes en dessous et au-dessus de la petite incision comme fixation naturelle pour immobiliser le cœur.
3. Résection de l’apex ventriculaire
   1. Localisez l’apex du ventricule gauche. Couper un diamètre de 1 mm de tissu de l’apex ventriculaire à l’aide de ciseaux d’iridectomie sous un stéréoscope.
   2. Confirmez que la chambre ventriculaire gauche est exposée et commencez à suinter.
   3. Appuyez doucement sur le cœur vers la cavité thoracique à l’aide d’un coton-tige.
   4. Suturez les muscles, les côtes et la peau à l’aide de 8-0 Sutures prolènes.
   5. Nettoyez soigneusement la souris après l’opération.
4. Soins post-opératoires
   1. Transférez la souris de la plate-forme d’utilisation vers une couverture chauffante à 37 °C pour réchauffer le corps immédiatement après l’opération.
   2. Confirmez l’anabiose de la souris en observant les signes suivants : restauration de la respiration spontanée, changement de couleur de la peau du pâle au rose et mouvement des membres.
   3. Ramenez la souris opérée à sa mère une fois qu’elle s’est rétablie.
   4. Mélangez la souris opérée avec les matériaux de nidification de sa mère si nécessaire.
      note: Il est important de retirer tous les chiots de 1 jour de la mère en même temps, puis de les remettre tous en même temps une fois que tous les chiots ont été récupérés.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Kit de dissociation cardiaque néonatale	Miltenyi Bio Tech, Teterow, Allemagne	130-098-373