Modèle de lymphœdème de la queue murine : une technique in vivo pour générer un lymphœdème soutenu dans la queue murine

Résumé

Source : Hassanein, A. H. et al., A Murine Tail Lymphedema Model. J. Vis. Exp. (2021).

Cette vidéo décrit une technique in vivo pour générer un lymphœdème de la queue murine, une accumulation anormale de liquide dans l’espace tissulaire interstitiel entraînant un gonflement de la queue. Le modèle est appliqué à l’étude des mécanismes et au traitement du lymphœdème.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Perturbation chirurgicale des lymphatiques de la queue de souris

1. Utilisez des souris C57BL/6 âgées de huit semaines de répartition égale entre les sexes.
2. Placez une souris sous anesthésie générale dans une chambre d’induction avec 3 à 4 % d’isoflurane dans 100 % d’oxygène, suivie d’une sédation d’entretien à 1 à 3 % pendant la procédure.
3. Administrer 0,5 mg/kg de buprénorphine à libération prolongée (SR) par voie sous-cutanée pour contrôler la douleur.
   note: Médicaments analgésiques supplémentaires administrés postopératoire : Carprofène une fois toutes les 24 h pendant au moins 48 h et Bupivacaïne une fois après l’incision ou avant de fermer l’incision, appliqué par goutte sur les bords de la peau (dure jusqu’à 4 à 6 h).
4. Positionnez la souris dorsalement et préparez la queue avec de l’alcool isopropylique à 70 %.
5. Mesurez le diamètre de la queue avant l’intervention par incréments de 5 mm en commençant à 20 mm de la base de la queue à l’aide d’un pied à coulisse. Ces mesures seront utilisées pour calculer le volume à l’aide de l’équation du cône tronqué.
6. Marquez une excision circonférentielle de 3 mm sur la queue à 20 mm de la base.
7. Effectuez une excision cutanée méticuleuse de 3 mm sur toute l’épaisseur à l’aide d’une lame chirurgicale stérile (taille 15), en laissant intacte toute la vascularisation sous-jacente sous grossissement microscopique chirurgical. Inciser la marque circonférentielle supérieure (à 20 mm de la base de la queue) d’abord à travers le derme, suivie d’une incision circonférentielle de pleine épaisseur de 3 mm distale jusqu’à la première incision
   1. Faites une incision verticale perpendiculaire de pleine épaisseur pour relier les deux incisions. Utilisez un ramasseur fin denté pour saisir un bord d’attaque et utilisez des microciseaux pour disséquer soigneusement profondément dans le plan avasculaire jusqu’au derme et superficiel jusqu’à l’adventice veineuse.
8. Injecter 0,1 mL de bleu d’isosulfan (1 %) par voie sous-cutanée proximale à l’extrémité de la queue.
9. Identifier les deux canaux lymphatiques adjacents aux veines latérales de la queue au microscope chirurgical. Les lymphatiques apparaîtront bleus à cause de l’injection d’isosulfan. Transecter les lymphatiques à l’aide de ciseaux microchirurgicaux droits. Utilisez les ciseaux pour disséquer soigneusement un plan entre la veine latérale et le lymphatique. Passez ensuite la pointe d’une lame de ciseau entre le vaisseau lymphatique et la veine latérale et fermez les lames pour transecter le vaisseau lymphatique.
10. Pansez la plaie de la queue avec un pansement transparent adhérent stérile. Vérifiez quotidiennement les incisions postopératoires pour vous assurer qu’elles ne sont pas infectées ou ne saignent pas et fournissez des soins aux plaies pendant 2 semaines.
11. Hébergez les animaux individuellement pour éviter toute blessure supplémentaire à la queue et pour éviter que les animaux ne se mordent, ce qui entraînerait des complications chirurgicales.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Microscope chirurgical	Leica, Wetzlar, Allemagne	N° MSV266
Pansement adhérent (Tegaderm)	3M, St. Paul, Minnesota.	1626W
C57BL/6 souris	Laboratoires Jackson	664
Pince Micro-Adson - 1x2 dents	Fine Science Tools (États-Unis) Inc.	Référence 11019-12
Aiguille jetable 30GX1	Fischer Scientific	305128
Utilisation des ciseaux	Fischer Scientific	Tél. : 12-460-796
IsosulfanBlue (Lymphazurine) 50mg/5ml	Mylan	Référence 67457-220-05