Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation et positionnement du laser Doppler
- Préparez un support pour la sonde laser Doppler en coupant l’extrémité d’une pointe de pipette de 10 μL (longueur 3-5 mm).
note: Tous les instruments sont stérilisés à l’aide d’un stérilisateur à billes chaudes. Les surfaces sont également désinfectées avant et après l’opération avec un spray désinfectant microbien. Avant l’intervention chirurgicale, les zones entourant la tête et la poitrine des souris sont désinfectées à l’aide d’un spray désinfectant pour les plaies.
- Injecter un analgésique à la souris 30 min avant l’intervention (4 mg/kg de carprofène et 0,1 mg/kg de buprénorphine, par voie intrapéritonéale).
- Anesthésier la souris en la plaçant dans la chambre d’induction avec un débit d’isoflurane de 4 % jusqu’à l’arrêt des mouvements spontanés du corps et des vibrisses.
- Placez la souris en position couchée dans la zone d’opération, le nez dans le masque d’anesthésie. Maintenez la concentration d’isoflurane à 4 % pendant une minute supplémentaire, puis réduisez-la et maintenez-la à 2 %.
- Réglez le coussin chauffant associé contrôlé par rétroaction pour maintenir la température du corps de la souris à 37 °C et insérez doucement la sonde rectale pour surveiller la température tout au long des procédures chirurgicales.
- Appliquez la pommade oculaire au dexpanthénol sur les deux yeux.
- Désinfectez la peau et les cheveux entourant l’œil gauche et l’oreille avec de l’éthanol à 70 %.
- Coupez le cuir chevelu entre l’oreille gauche et l’œil (1 cm de long) pour exposer l’os du crâne.
- Coupez et retirez le muscle temporal pour visualiser le MCA sous le crâne.
- Fixez avec de la colle la partie extérieure de la pointe en maintenant la sonde laser Doppler/fibre sur le dessus du MCA gauche avec de la colle. Ensuite, collez la peau pour fermer la plaie autour du porte-pointe. Appliquez 2-3 gouttes de colle durcissante pour accélérer le processus. Assurez-vous que la fibre laser Doppler n’est pas collée et qu’elle peut être facilement retirée du porte-pointe à tout moment.
