Biopsie par pincement guidée par coloscopie dans un modèle murin : une technique pour visualiser et extraire des échantillons de tissus du côlon de souris

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Coloscopie et induction de la plaie

1. Préassemblez les composants de l’endoscope en insérant d’abord l’endoscope à alésage rigide de 1,9 mm dans la gaine (figures 1A-B). Fixez la pompe à air (pour assurer l’insufflation du côlon) à l’aide du tube fourni, à la vanne de gaz située sur le côté gauche de la gaine à côté du canal de travail (Figure 1C).
   note: Bien que l’objectif décrit ici soit de 0°, un objectif de 30° peut également être utilisé à cette fin.
2. Assurez-vous que le canal de travail est en position ouverte et insérez une pince à biopsie 3 Fr dans le canal de travail et avancez-la jusqu’à l’extrémité de la gaine (tout en veillant à ce qu’elle ne dépasse pas de la gaine) (Figure 1C). Fixez l’endoscope assemblé à la source lumineuse et à l’appareil d’imagerie vidéo conformément aux instructions du fabricant.
3. Anesthésie la souris avec 5 % d’isoflurane avec de l’oxygène dans une chambre d’induction. Déplacez ensuite la souris vers une plate-forme de stadification endoscopique contenant un système de chauffage (pour prévenir l’hypothermie) sur sa face ventrale et maintenez-la sous anesthésie à l’aide d’un cône nasal contenant 2 % d’isoflurane avec de l’oxygène. Ajoutez une pommade vétérinaire aux yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie. Assurez-vous que la souris est complètement anesthésiée en pinçant doucement le pied arrière pour tester un réflexe.
   note: N’importe quelle souche ou sexe de souris peut être utilisé avec cette technique ; Cependant, il est préférable que les souris aient au moins 8 semaines, elles sont donc assez grandes pour la procédure.
   1. Ajoutez une pommade vétérinaire aux yeux pour prévenir la sécheresse sous anesthésie.
   2. Assurez-vous que la souris est complètement anesthésiée en pinçant doucement le pied arrière pour tester un réflexe.
4. Remplissez une seringue de 3 mL avec une aiguille de gavage pour rat avec une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) à température ambiante. Insérez l’aiguille à environ 1 cm dans l’anus de la souris et infusez doucement le PBS pour éliminer les matières fécales. Plusieurs boulettes fécales doivent sortir de la souris avec le PBS qui a été perfusé.
   note: L’instillation d’un volume excessif de PBS peut entraîner la formation de mousse dans la lumière, ce qui pourrait obscurcir la visualisation de la lumière.
5. Insérez l’endoscope assemblé à 0,5 cm dans l’anus de la souris. Avancez la pince à biopsie dans la lumière du rectum jusqu’à ce que les « mâchoires » complètes (y compris la charnière) de la pince soient au-delà de l’extrémité de la gaine (comme observé sur le moniteur vidéo). Tournez la pince de 90° de manière à ce que les mâchoires s’ouvrent dans une orientation est-ouest.
6. Pour faire une biopsie, ouvrez la pince et avancez-la d’environ 1 cm, fermez la pince et, d’un mouvement fluide, tirez rapidement sur la pince tout en les laissant fermées.
   1. Évitez d’insuffler complètement le côlon lors de la biopsie. Par conséquent, laissez le côté droit de la vanne de gaz ouvert pendant cette étape ; Bien qu’il faille noter qu’à l’ouverture de la forceps, il y a un risque d’endommager la muqueuse lorsque le côlon est dans cette position.

Graphique 1 : Articles nécessaires pour effectuer des biopsies. (A) Image de la lentille (a), de la gaine (b) et de la pince à biopsie (c). (B) Insertion de la lentille dans la gaine. (C) Insertion de pinces dans le canal de travail de la gaine (flèche pleine). La flèche pointillée indique l’emplacement correct pour la fixation de la pompe à air.