Modèle de plaie murine guidée par coloscopie : une méthode pour isoler le lit de plaie induite par la biopsie du côlon afin de comprendre le processus de guérison

Résumé

Source : Montrose, D. C., et al. Réalisation de biopsies par pincement guidées par coloscope chez la souris et évaluation des modifications tissulaires ultérieures. J. Vis. Exp. (2021).

Dans cette vidéo, nous décrivons une procédure permettant d’isoler le lit de la plaie induite par le coloscope à un moment approprié pour une analyse moléculaire détaillée. Cette analyse aide à comprendre le processus de cicatrisation des plaies dans les conditions inflammatoires du tractus gastro-intestinal.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Collecte du lit de la plaie pour analyse moléculaire

1. Euthanasier la souris par asphyxie au CO₂ suivie d’une luxation cervicale (ou d’une technique équivalente) le jour choisi après la biopsie.
2. Récoltez la région distale du côlon en ouvrant la peau et les muscles abdominaux pour exposer la cavité corporelle. Placez des ciseaux fermés sous le côlon et soulevez-le doucement pour le libérer du mésentère sous-jacent, puis coupez le côlon à son milieu et à l’anus pour le retirer de la souris.
3. Rincez le contenu fécal à l’aide d’une aiguille de gavage de rat attachée à une seringue de 20 ml remplie de PBS glacé, puis déposez le côlon sur du papier filtre.
4. Ouvrez le côlon longitudinalement sur du papier filtre en vous assurant que le côté mésentérique est face vers le bas contre le papier filtre. Appliquez du bleu de méthylène à 0,2 % sur la muqueuse à l’aide d’une pipette à pression pendant que le tissu est encore sur le papier filtre, puis égouttez l’excès de bleu de méthylène. Observez le côlon à l’aide d’un microscope à dissection et localisez le lit de la plaie (figure 1A).
5. À l’aide de ciseaux à micro-iris de 4 pouces, coupez autour du bord du lit de la plaie (figure 1A, cercle pointillé) en prenant soin de ne pas couper dans la couche musculaire (à moins que le muscle ne soit désiré) et transférez le lit de la plaie disséquée dans un tube à l’aide d’une pince à épiler à pointe fine pour la congélation instantanée ou la méthode de stockage souhaitée.
   note: La quantité de tissu collectée de cette manière est suffisante pour extraire l’ARN pour le séquençage de l’ARN ou une analyse équivalente.

Résultats

Graphique 1 : Images ex vivo et en coupe du lit de la plaie. (A) Un côlon a été prélevé sur une souris 2 jours après la biopsie, coloré au bleu de méthylène à 0,2 % et imagé au microscope de dissection. Le cercle pointillé indique les bords du lit de la plaie. La ligne noire indique l’emplacement approprié pour couper en deux le lit de la plaie/côlon avant l’enrobage pour la section. (B) Image...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Pince à biopsie, 3 Fr	Karl Storz	Référence 61071ZJ
isofluorane	Convoitise	Référence 2905
bleu de méthylène	Sigma-Aldrich	Référence M9140
Ciseaux Micro Iris	Integra	18-1619
scalpal avec lame #10	Hill-Rom	Référence 372610