Modèle de l’anse iléale de souris : un modèle chirurgical pour étudier la perméabilité intestinale chez la souris

Résumé

Source : Boerner, K., et al. Évaluation fonctionnelle de la perméabilité intestinale et de la migration transépithéliale des neutrophiles chez la souris à l’aide d’un modèle standardisé de l’anse intestinale. J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo montre la génération d’un modèle de boucle iléale pour étudier la perméabilité intestinale dans un modèle murin. Cette méthode fournit un modèle vivant pour comprendre la fonction de la barrière épithéliale et la réponse immunitaire qui en résulte.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Génération de la boucle iléale

1. Préparation de la peau : Frottez la fourrure de la ligne médiane abdominale avec des tampons imbibés d’alcool ou une éponge de gaze imbibée d’éthanol à 70 %. Ne mouillez pas une large zone de fourrure avec de l’alcool pour éviter l’hypothermie.
2. À l’aide de ciseaux, effectuez une laparotomie médiane. Faites une incision verticale au milieu de l’abdomen (environ 2 cm de longueur) et exposez le péritoine. Veillez à ne pas blesser les organes intra-abdominaux.
3. Placez de la gaze de coton humide prédécoupée sur la cavité intra-abdominale exposée.
4. Utilisez des cotons-tiges humides pour mobiliser et extérioriser le cæcum. Placez délicatement le cæcum sur la gaze de coton humide.
   note: Le cæcum est localisé dans le quadrant caudal gauche de la cavité abdominale chez la plupart des souris, indépendamment du sexe de l’animal.
5. À l’aide de cotons-tiges humides, on mobilise et extériorise doucement l’iléon dont la section terminale (extrémité distale) est fixée au cæcum (figure 1B).
6. Déployez au moins 6 cm d’iléon terminal sur la gaze de coton humide sans perturber les vaisseaux mésentériques et l’approvisionnement en sang. L’apport sanguin est maintenu s’il n’y a pas de saignement et si le tissu conserve sa couleur rose (Figure 1B).
   note: Évitez de dessécher les tissus exposés en les maintenant humides en permanence avec du HBSS chaud (toutes les 2 à 3 minutes) à l’aide d’une seringue de 10 ml préfixée à une sonde d’alimentation jaune.
7. Près du cæcum, identifiez l’artère principale du mésentère, qui alimente en sang l’iléon. Localisez ensuite deux sites de ligature dans le mésentère qui sont exempts de vaisseaux sanguins critiques.
8. À l’aide d’une pince à tissu émoussé, saisissez fermement l’iléon terminal (le plus proche du cæcum) et à l’aide d’une pince à pointe fine, fenestrez le mésentère en évitant les vaisseaux sanguins. Placez une suture en soie sur la perforation et faites un nœud chirurgical pour créer la première ligature (extrémité distale de la boucle).
9. À l’aide de la règle, mesurez à 4 cm de la première ligature et créez la deuxième ligature (extrémité proximale de la boucle) comme mentionné à l’étape 2.8 (Figure 1C).
10. Avec des ciseaux fins, coupez soigneusement à côté de chaque ligature pour isoler l’anse iléale de 4 cm, en gardant intacts l’apport sanguin et la membrane mésentérique.
    note: Coupez les deux extrémités du segment extériorisé de l’iLoop, puis rincez doucement comme une étape nécessaire pour éviter l’interférence avec le contenu luminal (matières fécales), facilitant ainsi la dispersion uniforme du FITC-dextran ou des stimuli chimiotactiques sur toute la longueur du segment isolé ainsi que permettant une quantification plus précise des leucocytes par cytométrie en flux. Cette procédure permet également une distension uniforme de la muqueuse après l’injection de volumes spécifiés de réactif et une meilleure reproductibilité entre animaux.
11. Rincer doucement le contenu du segment de l’anse iléale avec du HBSS chaud à l’aide d’une sonde d’alimentation jaune flexible fixée à une seringue de 10 ml.
12. Lister les deux extrémités coupées de l’anse iléale affleurante à l’aide d’une suture en soie.
13. À l’aide d’une seringue de 1 mL avec une aiguille de 30 g, injectez lentement 250 μL de réactif tel que le FITC-dextran ou la chimiokine dans la lumière intestinale. L’anse iléale va se gonfler provoquant une distension modérée de la muqueuse (Figure 1D).
    note: Injectez le réactif dans la lumière de l’anse du côté opposé de l’artère mésentérique. Veillez à ne pas retirer l’anse iléale de l’animal lors de l’injection pour éviter de déchirer les vaisseaux sanguins et d’induire des saignements.
14. À l’aide de cotons-tiges humides, remettez doucement l’anse iléale, l’iléon proximal et le cæcum.
15. Utilisez un porte-aiguille, une pince anatomique et des sutures en soie non résorbables 3.0 avec aiguille de coupe inversée pour fermer la paroi abdominale.
16. Placez l’animal dans une chambre d’anesthésie à température régulée pendant la période d’incubation.

Résultats

Graphique 1 : Le modèle de la boucle iléale. (A) Vue d’ensemble schématique du modèle de boucle iléale. La laparotomie médiane est réalisée sur des souris sous anesthésie et placée sur une planche de chirurgie à température contrôlée. (B) Extériorisation du cæcum (*), de l’iléon et du mésentère. Deux sites adéquats pour la ligature sont identifiés (1,2). (C) Isolez un segment de 4 cm de longue...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Equipement et matériel
Tampons d’alcool BD	Bd	326895
Aiguille BD PrecisionGlide, 25G x 5/8"	Bd	305122
Aiguille BD PrecisionGlide, 30 g x 1/2 po	Bd	305106
BD 1ml Seringue à tuberculine sans aiguille	Bd	309659
Tube à centrifuger de 15 ml	Corning	Référence 14-959-53A
Microplaque de polystyrène noir solide 96 puits de Corning	FisherScientific	Tél. : 07-200-592
Plat de culture non traité Corning, 10 cm	MilliporeSigma	CLS430588
Applicateur d’embout en coton (coton-tige), 6", stérile	FisherScientific	25806 2WC
Éponges de gaze remplies de coton Dynarex, non stériles, 2 » x 2 »	Medex	Référence 3249-1
Vaporisateur d’anesthésie EZ-7000 (système classique, y compris les unités de chauffage)	Systèmes E-Z	EZ-7000
Ciseaux Moria Fine	Le	Référence 14370-22
Puralube Vet Ogument, lubrifiant oculaire stérile	Dechra	12920060
Pince à anneau (pince à tissu contondant)	Le	Référence 11103-09
Roboz Surgical 4-0 Soie Tressée Noire, 100 YD	FisherScientific	NC9452680
Pince Semken (pince anatomique)	Le	Référence 1108-13
Sofsilk non résorbable enduit suture noire tressée soie taille 3-0, 18", aiguille 19mm longueur 3/8 cercle coupe inversée	HenrySchein	SS694
Pince fine d’étudiant, coudée	Le	Référence 91110-10
Seringue 10ml PP/PE sans aiguille	Millipore Sigma	Z248029
Tubes d’alimentation jaunes pour rongeurs 20G x 30 mm	Instech	FTP-20-30
Solutions et tampons
La solution saline équilibrée de Hanks	Corning	Référence 21-023-CV
Solution saline tamponnée au phosphate sans calcium ni magnésium	Corning	Référence 21-040-CV
L’isoflurane	halocarbure	Référence 12164-002-25