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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation des animaux
- Sédater un porc par injection intramusculaire (3,75 mg/kg) de tilétamine (3,75 mg/kg), de zolazépam (3,75 mg/kg) et de dexmédétomidine (37,5 μg/kg). Attendez qu’il devienne inconscient.
- Préparez un cathéter intraveineux en insérant une canule de 20 G dans la veine de l’oreille.
note: Assurez-vous que la canule est dans la veine en injectant 5 à 10 ml de solution saline à travers la canule. Si la veine a été manquée, cela se remarquera par un petit œdème dans le tissu de l’oreille.
- Intubez le porc pour vous assurer que le rythme respiratoire peut être régulé tout au long de l’opération.
note: Assurez-vous que l'intubation est réussie en exerçant une pression sur le thorax du porc et confirmez que de l'air expiré de force s'échappe du tube d'intubation.
- Fixez le tube d’intubation à un ventilateur réglé à une fréquence respiratoire de 14 respirations/min.
- Connectez un oxymètre de pouls et un brassard à la queue pour surveiller la fréquence cardiaque (FC), la pression artérielle (PA) et la saturation en oxygène (sats). Insérez un thermomètre rectal pour surveiller la température centrale.
- Préparez une poche IV de kétamine (5 mg/kg/min), de midazolam (0,25 mg/kg/min) et de fentanyl (2,5 μg/kg/min) dans une solution saline et commencez à perfuser par la veine de l’oreille à environ 2 gouttes/
note: Tout au long de la chirurgie, il peut être nécessaire d'augmenter ou de diminuer le débit de perfusion en fonction des signes vitaux de l'animal.
- Avec le porc en position couchée, palper l’arrière de la tête et du cou de l’animal pour localiser et marquer la crête occipitale et la colonne vertébrale des premières vertèbres thoraciques et la base de chaque oreille.
- Tracez une ligne droite entre la crête et les vertèbres le long de l’axe longitudinal. Tracez deux lignes de la crête à la base de chaque oreille en suivant la base du crâne (figure 1A).
- Vérifiez que l’animal est dans un sommeil profond en serrant soigneusement la queue et en surveillant l’absence de réflexe de queue.
note: Si l’animal est toujours réflexe, le débit de perfusion d’anesthésique doit être augmenté progressivement jusqu’à ce que l’animal ne présente plus de réflexe.
2. Chirurgie
REMARQUE : Tout au long de l’opération, il est nécessaire d’avoir au moins un assistant pour aspirer le saignement léger et cautériser les vaisseaux sectionnés.
- À l’aide d’un scalpel avec une lame # 21, faites une incision cutanée le long de la ligne longitudinale jusqu’au muscle.
- Étendez deux incisions cutanées perpendiculaires plus loin le long des épaules, de 10 à 15 cm de longueur.
- À partir des crêtes occipitales, faites des incisions cutanées le long de la ligne jusqu’à la base de chaque oreille.
- En saisissant les coins de la peau formés au niveau de la crête occipitale à l’aide d’une pince anatomique, séparez soigneusement la peau du muscle sous-jacent en passant légèrement la lame du scalpel sur le fascia, en passant du rostral au caudal. Une fois que la peau a été réséquée à la suite de chacune des cinq incisions, des parties des muscles trapèzes devraient alors être visibles.
- Faites une incision longitudinale avec le scalpel, d’environ 1 cm de profondeur, à l’endroit où le trapèze se rejoint sur la ligne médiane.
note: Lors de la coupe des muscles, il y a une propension accrue à saigner, donc le cautériseur doit être prêt. Si un vaisseau plus gros est sectionné, une personne doit le comprimer rapidement avec la gaze, tandis que l’autre personne utilise le cautérisant.
- À l’aide d’une combinaison de pinces chirurgicales droites et courbes, effectuez une dissection contondante le long de la coupe longitudinale dans les muscles. Cela séparera le ventre du trapèze, ainsi que le muscle semi-spinal capitus biventer sous-jacent.
- Sectionnez toutes les fibres musculaires persistantes avec un scalpel et poursuivez la dissection contondante jusqu’à ce que le semi-spinal capitus complexus devienne visible.
- Sectionner les origines des muscles trapèzes et semi-épineux du capitus biventer le long de la face postérieure du crâne. Séparez-les soigneusement longitudinalement avec le scalpel en effectuant une dissection contondante jusqu’à ce que le semi-spinalis capitus complexus soit entièrement visible.
- Rétractez les muscles trapèzes et semi-spinalis capitus biventer à l’aide d’écarteurs auto-retenus.
- À l’endroit où les ventres du capitus complexus semi-spinalis se rejoignent sur la ligne médiane, faites une incision longitudinale avec le scalpel d’environ 1 cm de profondeur.
note: Soyez conscient de tout saignement supplémentaire ici. Les saignements peuvent être gérés à l’aide d’une combinaison de cotons-tiges et de cautérisation.
- À l’aide d’une pince chirurgicale, effectuez une dissection émoussée en travaillant le long de la coupe longitudinale entre les ventres musculaires jusqu’à ce que la face dorsale de l’atlas (IC) soit palpable.
- Sectionner les origines des muscles du capitus complexus semi-spinalis le long de la face postérieure du crâne et les séparer longitudinalement des vertèbres sous-jacentes par scalpel et dissection contondante.
- Rétractez les muscles semi-épineux du capitus complexus à l’aide d’un autre ensemble d’écarteurs auto-retenus.
- À l’aide d’un scalpel, retirez soigneusement tout tissu restant recouvrant la région où l’atlas rencontre la base du crâne.
- En plaçant un bras sous le cou de l'animal et un doigt à la jonction de l'atlas et du crâne, élevez simultanément la tête et fléchissez le cou tout en palpant avec le doigt pour révéler la citerne magna à l'aide de l'autre main.
note: La citerne magna est reconnaissable à la palpation comme une structure élastique solide avec une petite quantité de rebond lorsque la pression est relâchée avec le doigt.
