Livraison de molécules traceurs dans la citerne magna : une méthode pour délivrer des molécules traceurs fluorescentes par canulation directe de la citerne magna chez le porc

Résumé

Source : Bèchet, N. B., et al. Implantation directe de canules dans la citerne Magna de porcs. J. Vis. Exp. (2021).

Cette vidéo décrit le protocole de délivrance de molécules traceurs par canulation directe de la citerne magna dans un cerveau de porc. Cette méthode permet de visualiser la distribution du liquide céphalo-rachidien dans le système glymphatique.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Canulation et injection

REMARQUE : Cette étape nécessite au moins deux personnes et s'effectue avec la tête levée et le cou fléchi.

1. Commencez avec un porc anesthésié, pré-opéré avec une citerne magna accessible chirurgicalement.
2. Assurez-vous qu’une personne élève et fléchit la tête et le cou de l’animal pendant que l’autre palpe la citerne magna en notant son emplacement anatomique.
3. Introduisez lentement et soigneusement une canule de 22 G à travers la dure-mère et dans la citerne magna à un angle oblique par rapport à l’axe longitudinal.
   note: N’insérez pas la canule trop profondément, car cela pourrait endommager le cerveau. Savoir jusqu’où insérer la canule vient avec l’expérience de comprendre ce que ressent la canule pour percer la dure-mère. Essentiellement, tout comme la dure-mère a été percée, la canule est alors suffisamment profonde pour une injection de traceur réussie. Cette profondeur est d’environ 3 à 5 mm, mais variera en fonction de la taille ou de l’âge de l’animal. Le succès de la canulation devrait être immédiatement mis en évidence par la visualisation d’un LCR clair et pulsatile remontant dans la canule. Pour le meilleur résultat, il est recommandé de pratiquer plusieurs canulations au préalable chez les animaux euthanasiés afin de mieux comprendre le piercing dural.
4. Rétractez l’aiguille de la canule et placez un capuchon sur le verrou.
5. Tout d’abord, appliquez de la superglue et un accélérateur à l’endroit où la canule pénètre dans le tissu, puis appliquez le ciment dentaire. Attendez 5 min que le ciment durcisse.
6. Retirez délicatement le capuchon de la canule et fixez l’extrémité mâle du taraud de ligne IV avec une extension de 10 cm, avec le traceur, à la canule.
7. Injectez lentement le traceur à la main ou à l’aide d’une pompe à micro-infusion à un débit de 100 μL/min. Retirez le robinet de ligne IV à 3 voies avec rallonge de 10 cm et remplacez-le par le capuchon. Le traceur devrait maintenant être visible en train de pulser à la base de la canule.
   note: Si vous injectez à la main, faites-le jusqu’à ce que le traceur soit encore visible dans la tige de la canule, à environ 1 à 2 mm au-dessus de l’endroit où le ciment dentaire recouvre la tige.
8. Après l’injection, placez des sacs de sable sous le cou pour maintenir une certaine flexion. La tête peut alors être relâchée et l’animal est laissé en position couchée au repos.
9. Relâchez les écarteurs auto-retenus et placez les muscles comme ils sont couchés avant. Rapprochez la peau sur les muscles à l’aide de pinces à serviettes chirurgicales.
10. Couvrez les pinces à serviettes et l’incision avec de la gaze puis une couverture pour limiter les pertes de chaleur.
11. Laisser circuler le traceur pendant le temps souhaité avant d’euthanasier l’animal par injection intraveineuse de Pentobarbital (140 mg/kg). Confirmer l’euthanasie par l’absence de bruits cardiaques à l’auscultation à l’aide d’un stéthoscope.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Aiguille 18G	Mediq
Seringue de 1 ml	FischerSci	15849152
Canule 20G	Mediq	Na
Canule 22G	Mediq	Na
Albumine sérique bovine Alexa-Fluor 647 Conjuguée	ThermoFischer	N° A34785	2 flacons (10 mg)
CaCl2	Sigmaaldrich	Réf. C1016
Ciment dentaire	Agnthos	Référence 7508
glucose	Sigmaaldrich	Référence G8270
Accélérateur Insta-Set CA	BSI-Inc	BSI-151
TARAUD DE LIGNE IV, 3 VOIES avec extension de 10 cm	Bbraun	Na
Kcl	Sigmaaldrich	P9333
marqueur	Na	Na
MgCl2	Sigmaaldrich	Référence M8266
Eau MilliQ	Na	Na
NaCL	Sigmaaldrich	Réf. S7653
NaH2PO4	Sigmaaldrich	Réf. S8282
NaHCO3	Sigmaaldrich	S5761
salin	Mediq	Na
Enrouleurs auto-retenus	Na	Na
Superglue	Na	Na
Ciseaux chirurgicaux courbés	Na	Na
Pinces à serviettes chirurgicales	Na	Na