Surveillance multisystémique d’anomalies épileptiques chez le lapin : méthode d’enregistrement simultané de l’EEG, de l’ECG, de la canographie et de l’oxymétrie pendant les crises induites

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Pour permettre aux lapins de s’acclimater dans les dispositifs de contention et pour que l’enquêteur puisse confirmer objectivement la stabilisation des fréquences cardiorespiratoires, instrumentez tous les lapins avec les capteurs cardiorespiratoires et neuronaux et effectuez une surveillance vidéo continue pendant > 1 heure, 1 à 3 fois par animal.

2. Expérience de médication intraveineuse (Pentylènetétrazol, PTZ)

1. Pour visualiser la veine marginale de l'oreille, rasez la surface postérieure de l'oreille du lapin. Utilisez une lingette à l’éthanol à 70 % pour désinfecter le site et dilater la veine marginale de l’oreille. Ceci est indiqué par l’ovale pointillé noir de la figure 1F.
2. À ce stade, demandez à un expérimentateur de couvrir le visage du lapin avec sa main pour réduire le stress de la procédure pour le lapin. Un deuxième expérimentateur canule soigneusement la veine marginale de l’oreille à l’aide d’un angiocathéter stérile de 25 G.
3. Une fois le cathéter dans la veine, placez un bouchon d’injection stérile à l’extrémité du cathéter afin qu’une aiguille puisse introduire le médicament par voie intraveineuse. L’emplacement du bouchon d’injection est indiqué par un cercle bleu sur la figure 1G.
4. Fabriquez une attelle en enveloppant une gaze de 4 x 4 pouces avec du ruban adhésif afin qu'elle forme un tube et en la plaçant à l'intérieur de l'oreille du lapin. Ensuite, collez l’attelle sur l’oreille de manière à ce que le cathéter soit fixé en place et reste droit, comme l’oreille non cathétérisée.
5. Injecter 1 mL de 10 unités USP par mL de solution saline héparinisée.
   note: Le cathéter et le vaisseau doivent être visiblement débarrassés de l’air et rester perméables. Si le cathéter n’est pas dans le vaisseau, la seringue ne poussera pas facilement et il y aura une accumulation de solution saline dans le tissu sous-cutané.
6. Donnez aux lapins des doses progressives de PTZ par voie intraveineuse de 1 mg/kg à 10 mg/kg par incréments de 1 mg/kg toutes les 10 min. Notez au début de chaque dose l’animal qui reçoit l’injection et la concentration du médicament.
   note: Cela permet d’évaluer les effets aigus et additifs de l’administration de PTZ. Alternativement, pour évaluer davantage les effets chroniques du PTZ à faible dose, le lapin reçoit des doses répétées à chaque concentration à faible dose, 7 doses à 2 mg/kg, 3 doses à 5 mg/kg, puis 3 doses à 10 mg/kg, chaque dose est séparée de 10 min.
7. Après chaque dose, surveiller attentivement la vidéo-EEG-ECG-capnographie-oxymétrie pour détecter toute anomalie neurocardiaque, électrique et respiratoire et des signes visuels d’activité épileptiforme. Notez ces changements en temps réel et lors de la post-analyse.
   note: L’activité convulsive commence souvent dans les 60 secondes suivant l’administration du PTZ.

Figure 1 : Lapin connecté à l’équipement.(A) L’emplacement des électrodes ECG, le bras gauche est indiqué par un point jaune. Le bras droit est indiqué par un point blanc. La jambe gauche est indiquée par un point rouge. Le sol antérieur à la jambe droite est indiqué par un point vert. (B) Lapin en contention avec électrodes ECG et EEG attachées. (C) Lapin juvénile dans une contention avec les modifications appropriées pour accueillir un lapin plus petit, y compris un booster sous le lapin, de la mousse pour le cou et un tuyau en PVC coupé. (D) Lapin dans la contention avec emplacement des électrodes EEG. Le frontal droit est indiqué par un point orange. Le frontal gauche est indiqué par un point rouge. L’occipital droit est indiqué par un point jaune. L’occipital gauche est indiqué par un point bleu. La référence est indiquée par un point noir. (E) Lapin en contention avec stimulateur photique et configuration de la cabine miroir. La source lumineuse est indiquée par un point blanc. (F) Veine marginale de l'oreille après que l'oreille du lapin a été rasée et essuyée avec de l'alcool. (G) Lapin avec angiocathéter solidement collé dans la veine marginale gauche de l’oreille. Le site d’injection du bouchon est indiqué par un point bleu. (H) Lapin avec un masque facial fixé à la gaine de capnographie par une pièce en T contenant une valve unidirectionnelle. (I) Schéma du masque facial et de la pièce en T reliés à la tubulure de capnographie. Pendant l’inspiration, l’air ambiant peut pénétrer dans la pièce en T par une vanne unidirectionnelle (flèche verte). Lors de l’expiration, le CO2 quitte la pièce en T en pénétrant dans le tube de capnographie (flèche jaune). En raison de la faible quantité d’espace mort, très peu de CO2 est retenu dans la pièce en T et est généralement inférieur à 5 mmHg.