Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Stérilisation
- ÉTAPE CRITIQUE : Désinfecter toutes les pinces et ciseaux en les trempant pendant 1 h dans une solution à 5 % (v/v) de Distel dans de l’eau distillée, nettoyer à l’aide d’une brosse, rincer à l’eau du robinet et stériliser au four à 185 °C pendant au moins 2 h.
- Stérilisez tous les autres objets en verre et réactifs en les faisant cuire à l'autoclave à 121 °C pendant 15 minutes ou préparez les réactifs selon les instructions du fabricant. Effectuer les procédures suivantes dans une enceinte de sécurité microbiologique de classe II.
2. Collecte d’échantillons
- Collecte d’yeux de porc
- De grandes truies blanches, un croisement avec un verrat du Hampshire a été utilisé. Les animaux ont été étourdis par un courant électrique et les yeux ont été énucléés 2 h plus tard dans l’abattoir.
- ÉTAPE CRITIQUE : Une fois énucléés, transférez les yeux au laboratoire dans une solution saline stérile tamponnée au phosphate (PBS) pour éviter qu’ils ne se dessèchent et traitez-les immédiatement à leur arrivée.
3. Préparation du bouton cornéo-scléral
- Utilisez une pince stérile pour tenir le tissu entourant le globe oculaire et transférez-le dans une boîte de Pétri. Sur une boîte de Pétri, retirez la conjonctive et le tissu musculaire autour du globe oculaire à l’aide de la lame de scalpel n° 15 et d’une pince.
- Soulevez doucement le globe oculaire tout en tenant le nerf optique à l’aide d’une pince et transférez-le dans un bocal de 0,5 L rempli de PBS stérile.
- Une fois que tous les yeux sont débarrassés des tissus environnants, déplacez-les à l’aide d’une pince stérile dans un autre pot de 0,5 L rempli de povidone iodée à 3 % (v/v) de PBS et laissez agir 1 min.
- Transférez les globes oculaires dans un autre pot de 0,5 L avec du PBS stérile.
- Utilisez une pince pour maintenir l’œil immobile sur une boîte de Pétri et faites une incision près de la cornée avec une lame de scalpel n° 10A.
- ÉTAPE CRITIQUE : Tenez le bord de la coupe et utilisez des ciseaux pour exciser la cornée en laissant environ 3 mm de sclérotique entourant la cornée. Assurez-vous que l’extrémité tranchante des ciseaux ne perce pas l’iris ou le tissu choroïdien et qu’elle se trouve dans l’espace supra-choroïdien.
- Tenez le bouton cornéo-scléral avec une pince et utilisez une autre paire de pinces à extrémité pointue pour séparer doucement le tissu uvéal.
- Soulevez le bouton cornéoscléral du globe restant et rincez-le brièvement dans une solution de povidone iodée à 1,5 % (v/v) dans du PBS dans une plaque à 12 puits.
- Placez le bouton cornéoscléral dans une autre plaque à 12 puits remplie de PBS stérile.
