Extraction de tissus bronchiolaires de porc : une procédure pour disséquer des coupes de tissus bronchiolaires de poumons porcins

Résumé

Source : Harrington, N. E. et al. Essai d’efficacité des antibiotiques dans un modèle ex vivo de biofilms de Pseudomonas aeruginosa et de Staphylococcus aureus dans le poumon de la mucoviscidose. J. Vis. Exp. (2021)

Dans cette vidéo, nous décrivons une intervention chirurgicale visant à extraire des tissus bronchiolaires d’un poumon de porc prélevé. Le tissu bronchiolaire ex vivo pourrait être utilisé pour développer des modèles d’infection afin d’étudier les infections pulmonaires chroniques.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Dissection de tissu pulmonaire de porc ex vivo (EVPL)

1. Prélevez les poumons de la source désignée dès que possible après l’abattage, en veillant à ce qu’ils soient conservés au froid en les transportant au laboratoire dans une glacière domestique.
   note: Les poumons plus proches du jour de l’abattage présentent moins d’ecchymoses lors de l’entreposage, mais les tissus conservés dans un entrepôt frigorifique jusqu’à 4 jours après l’abattage peuvent également être utilisés. Comme la glacière doit être apportée à la boucherie ou à l'abattoir, elle doit être décontaminée selon les directives du laboratoire local après chaque utilisation et entreposée à l'extérieur du laboratoire de microbiologie lorsqu'elle n'est pas utilisée, afin de réduire le risque de contamination et de bris de confinement.
2. En travaillant sur une surface stérilisée et sous une flamme, placez les poumons sur une planche à découper en plastique propre recouverte de papier d’aluminium autoclave. Vérifiez que les bronchioles restent intactes. S’il y a eu des dommages à l’abattoir ou pendant le transport, les poumons ne sont pas adaptés à l’utilisation.
3. Chauffez un couteau à palette sous une flamme et touchez très brièvement le couteau à la zone du poumon entourant la bronchiole pour stériliser la surface du tissu.
4. Coupez le tissu superficiel entourant la bronchiole à l’aide d’une lame de rasoir stérile montée. Faites des incisions parallèles à la bronchiole pour éviter tout dommage.
5. Une fois la bronchiole exposée, faites une incision transversale à travers la bronchiole au point le plus haut visible pour libérer la bronchiole.
6. À l’aide d’une pince stérile, tenez légèrement l’extrémité libre de la bronchiole et coupez tout tissu indésirable restant à l’aide d’une lame de rasoir stérile montée. Faites une dernière incision transversale à travers la bronchiole avant qu’une ramification ne soit visible pour retirer la bronchiole des poumons.
7. Placez les bronchioles dans le premier lavage DMEM/RPMI 1640. Laissez les bronchioles dans le lavage et répétez les étapes 1.2 à 1.5 pour prélever des sections supplémentaires de bronchioles dans le même poumon si nécessaire pour obtenir des sections de tissu suffisantes.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Éthanol à 70 % ou similaire pour la stérilisation de surface et l’équipement de dissection de flamin GOF
Feuille d’aluminium - pré-stérilisée par autoclave - pour couvrir la planche à découper sur laquelle vous allez disséquer les poumons
bec Bunsen
Planche à découper - nous recommandons une planche en plastique pour permettre une décontamination facile avec de l’alcool.
Glacière pour transporter les poumons au laboratoire
Ciseaux de dissection de différentes tailles
Milieu Eagle modifié de Dulbecco (DMEM)
Fisherbrand Tubes renforcés de 2 mL	Thermo Fisher	15545809
Grand couteau à palette
Lames de rasoir montées
Planche à découper en plastique et papier d’aluminium pour créer une surface de dissection stérile et nettoyable
Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 moyen
Sélection des pinces (pointes émoussées recommandées)
Des contenants appropriés pour l'élimination des objets tranchants et des tissus de porc contaminés, conformément aux politiques de santé et de sécurité de votre établissement.