Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Animaux et logement
- Acquérir des lapins blancs de Nouvelle-Zélande (NZW) pesant 2-3 kg.
- Hébergez les lapins individuellement dans des cages avec un contrôle strict de la température (65 ± 5 °F) et de l’humidité (45 ± 5 %). L’éclairage doit avoir un cycle marche/arrêt de 12 heures.
- Fournir un accès illimité à l’eau et à la nourriture standard pour lapins. Éliminez les enrichissements alimentaires car ils peuvent contenir de la vitamine A qui affecte l’œil.
- Acclimatez les animaux pendant au moins 2 semaines avant les mesures de base ou l’induction de la sécheresse oculaire.
2. Méthodes d’anesthésie et d’euthanasie
REMARQUE : Toutes les procédures nécessitent une sédation légère, à l’exception de l’injection de Con A qui nécessite une sédation modérée.
- Pour une sédation légère, injectez de l’acépromazine (1 mg/kg) par voie sous-cutanée sur les épaules à l’aide d’une aiguille de calibre 26. Critère d’évaluation de la sédation légère : les animaux maintiennent une position de tête détendue avec les lobes d’oreille qui ne sont plus complètement droits.
note: Si le critère d’évaluation approprié n’est pas atteint, une injection supplémentaire d’acépromazine peut être administrée. Les animaux doivent toujours rester éveillés, réactifs au toucher de leurs moustaches et ne jamais montrer de respiration ralentie.
- Pour une sédation modérée, donnez d’abord à l’animal de l’acépromazine comme ci-dessus. Une fois le point final atteint (voir la remarque ci-dessus), administrer l’isoflurane à l’aide d’un masque à gaz dont le débit d’O2 est réglé à 1 L/min et l’administration d’isoflurane réglée à 5 % (figure 1).
- Administrez de l'isoflurane jusqu'à ce que le teint du lapin soit complètement détendu et que les oreilles soient complètement tombantes.
note: Aucun mouvement musculaire compensatoire ne doit se produire lorsque l’animal est tourné sur le côté ; La respiration reste toujours spontanée.
- La récupération spontanée se produit dans les 2 à 5 minutes : les signes comprennent des mouvements spontanés de la tête et une augmentation ou un tonus musculaire normal. Une fois la procédure expérimentale terminée avec une sédation modérée, observez les lapins pendant environ 30 minutes ou jusqu’à ce que leur comportement revienne à la normale.
note: La pommade ophtalmique n’est pas nécessaire pendant l’une ou l’autre forme de sédation. 1) Dans la sédation légère, les animaux sont toujours alertes et maintiennent un réflexe de clignement des yeux. Dans la sédation modérée, l’inhibition du réflexe de clignement est si courte que la surface oculaire n’est pas à risque. 2) La mise en place d’une pommade ophtalmique sur la surface oculaire empêche la visualisation des structures évaluées pendant les tests.
- Euthanasie : Administrer une surdose de pentobarbital par voie intraveineuse (100 mg/kg).
3. Induction et traitement de la sécheresse oculaire
REMARQUE : Trois parties du système de glandes lacrymales orbitales sont injectées.
- Sédater les lapins avec de l’acépromazine 0,2 mg/kg par voie sous-cutanée.
- Cisaillez la fourrure dans la zone périorbitaire et du cuir chevelu et enlevez complètement toute fourrure résiduelle à l’aide de Nair. Laisser la peau entièrement lisse pour une meilleure visualisation des caractéristiques anatomiques et une injection de concanavaline A guidée par l’échographie (figure 2).
- Induire une sédation modérée comme décrit ci-dessus.
- Injection de la partie palpébrale de la glande lacrymale supérieure (PSLG)
note: Effectuez d’abord l’injection de PSLG.
- Appliquer sur l’œil approprié 25 μL de lidocaïne 1 % sans conservateur à l’aide d’une micropipette.
- Retournez la paupière supérieure et appliquez une légère pression médiale sur le bord orbitaire postérieur jusqu’à ce que la protubérance marquant la partie palpébrale de la glande soit visible. Le PSLG se présente sous la forme d’une petite élévation bulbeuse dans la partie postérieure (temporale) de la paupière supérieure.
note: Pour visualiser le tissu de la glande pendant le processus d’apprentissage, appliquez 5 % de fluorescéine sur la zone (Figure 3A). On peut voir des larmes couler du PSLG bulbeux. L’application de fluorescéine n’est pas nécessaire pour l’administration de Con A ; On le fait uniquement à des fins d’illustration pour montrer le tissu glandulaire.
- À l’aide d’une pince à dents fines et d’une aiguille de calibre 27 sur une seringue à tuberculine, pénétrer directement dans la glande par voie transconjonctivale. Enfoncez l’aiguille de 2 mm dans le tissu et injectez 500 μg de Con A dans un volume de 0,1 mL (figure 3B).
REMARQUE : Cette injection peut parfois être douloureuse. Si nécessaire, maintenez les animaux sous isoflurane jusqu’à ce que cette injection soit terminée.
