Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation des animaux
REMARQUE : Les parties du système de glandes lacrymales orbitales sont injectées.
- Sédater les lapins avec de l’acépromazine 0,2 mg/kg par voie sous-cutanée.
- Cisaillez la fourrure dans la zone périorbitaire et du cuir chevelu et enlevez complètement toute fourrure résiduelle à l’aide de Nair. Laisser la peau entièrement lisse pour une meilleure visualisation des caractéristiques anatomiques et l’injection de concanavaline A guidée par l’échographie (figure 1).
- Induire une sédation modérée comme décrit ci-dessus.
2. Injection de la glande lacrymale supérieure orbitaire (OSLG)
REMARQUE : OSLG suit en succession rapide.
- Appliquez une pression médiane sur le globe, ce qui fait saillir l’OSLG de l’incisure postérieure. Appliquez une pression médiane sur le globe (figure 2, flèche rouge) avec la protubérance de l’OSLG à partir de l’incisure postérieure. La protubérance sert de localisation macroscopique pour trouver l’incisure postérieure.
- Utilisez des pinces incurvées avec les pointes fermées pour indenter la zone jusqu’à ce que l’ouverture osseuse du crâne se fasse sentir. Celle-ci sera en forme de fente avec une direction avant/postérieure sous la protubérance.
- Appliquez une pression modeste à l’aide d’une pince pour laisser une empreinte dans la peau, qui servira de point de repère pour la mise en place de l’aiguille (figure 3A).
- Insérez une aiguille (seringue à tuberculine avec une aiguille de calibre 27 de 5/8 de pouce) perpendiculairement à la peau au-dessus de la marque d’indentation (figure 3B) ~ 1/4 de pouce dans l’incisure, puis redirigez l’aiguille vers l’arrière et l’extérieur vers le canthus latéral en visant le point médian entre le site d’injection et le bord orbitaire osseux.
note: Si l’incisure n’est pas ciblée avec précision avec l’aiguille, le crâne bloque sa progression.
- Une fois que le moyeu de l’aiguille est atteint, injectez lentement 1000 μg de Con A dans un volume de 0,2 mL (figure 3C).
- Terminez l’injection du PSLG et de l’OSLG en 2-3 minutes
- Retirer l’animal de la sédation à l’isoflurane (si ce n’est pas déjà fait). L’injection de la glande lacrymale inférieure (ILG) peut généralement être effectuée sans sédation supplémentaire.
