Prélèvement de cartilage articulaire sur les articulations d’un donneur d’équidés : une intervention chirurgicale pour isoler le tissu conjonctif vasculaire des articulations cadavériques d’un donneur d’équidés

Dans cet article

Résumé

Source : Benders, K. E. M. et al. Fabrication d’échafaudages matriciels décellularisés dérivés du cartilage. J. Vis. Exp. (2019)

Dans cette vidéo, nous démontrons l’extraction du cartilage articulaire d’une articulation cadavérique équine. Le cartilage articulaire isolé peut être utilisé pour une analyse plus poussée en aval.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE

1. Prélèvement de cartilage articulaire sur des articulations de donneurs (cadavériques)

Avant l’étape de récolte, préparez 1 L de solution de lavage du cartilage, composée d’une solution saline stérile tamponnée au phosphate (PBS), complétée par 100 U/mL de pénicilline, 100 μg/mL de streptomycine et 1 % (v/v) d’amphotéricine B.
Portez des gants et une blouse de laboratoire pendant toute la procédure de récolte, car le donneur peut être porteur d’agents pathogènes.
Obtenir une articulation intacte (cadavérique) pour l’isolement du cartilage.
note: À ce stade, la peau autour de l’articulation est encore intacte. Le cartilage de grasset équin obtenu à partir d’un cheval a été utilisé dans ce protocole, mais d’autres articulations d’autres espèces peuvent également être utilisées.
Retirez la peau située autour de la zone articulaire d’intérêt à l’aide d’un scalpel et d’une pince à épiler chirurgicale. De plus, retirez l’excès de graisse et de tissu musculaire, si nécessaire, sans endommager l’articulation sous-jacente. En option, transférez le cadavre préparé dans une enceinte de sécurité biologique.
Pour réaliser une arthrotomie, c’est-à-dire une séparation de l’articulation, il faut d’abord définir l’endroit où l’articulation s’articule en effectuant une extension et une flexion de l’articulation.
Retirez soigneusement plus de couches de graisse, de muscles et de tendons à l’aide d’un scalpel et d’une pince à épiler chirurgicale pour ouvrir la zone articulaire.
Faites une incision pour atteindre la cavité articulaire.
note: La cavité articulaire est remplie de liquide synovial, qui peut s’écouler de la cavité lors d’une incision correcte.
Continuez à ouvrir complètement l’articulation en coupant les tendons qui maintiennent l’articulation ensemble.
Inspectez le cartilage pour tout dommage macroscopique.
REMARQUE : Si le cartilage articulaire n’a pas un aspect brillant et lisse ou si des cloques, des fentes ou des défauts évidents sont présents, jetez le cartilage.
Utilisez un scalpel stérile pour retirer le cartilage de l’os sous-chondral. Coupez jusqu’à l’os sous-chondral pour enlever également la zone profonde du cartilage (Figure 1). Pour éviter que le cartilage ne se dessèche, versez régulièrement une solution de lavage du cartilage sur le cartilage.
note: À ce moment-là, la taille des tranches de cartilage n’a pas d’importance.
Prélever les tranches de cartilage dans des tubes de 50 mL contenant une solution de lavage du cartilage préalablement préparée (figure 2A).
Après avoir recueilli le cartilage de toutes les zones d’intérêt, congelez les tranches de cartilage dans de l’azote liquide pendant 5 min.
Transférez les tranches de cartilage dans des tubes de 50 mL et lyophilisez immédiatement les tranches de cartilage pendant 24 h dans un lyophilisateur. Réglez le lyophilisateur à environ 0,090 mbar lorsque le condenseur à glace est à -51 °C (Figure 2B).
Conservez les tranches de cartilage dans un endroit sec à température ambiante jusqu’à une utilisation ultérieure.

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Résultats

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Figure 1 : Genou équin après l’ablation du cartilage de pleine épaisseur. Le cartilage est retiré des condyles à l’aide d’un scalpel jusqu’à ce que la couche de cartilage calcifiée qui ne peut pas être coupée à l’aide d’un scalpel soit atteinte.