Isolement de l’aorte porcine : une intervention chirurgicale pour exciser l’aorte thoracique de porcs miniatures pour une analyse en aval

Dans cet article

Résumé

Source : Zhao, Y., et al. Isolement et culture de cellules endothéliales aortiques primaires de porcs miniatures J. Vis. Exp. (2019)

Dans cette vidéo, nous montrons une procédure d’ablation chirurgicale de l’aorte de porcs miniatures. Les cellules endothéliales prélevées à partir de ces aortes isolées peuvent être cultivées davantage dans des conditions in vitro pour étudier la coagulation et les réponses immunitaires.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Chirurgie et préparation à l’isolement des cellules endothéliales de l’aorte porcine

Désinfection de la salle d’opération avec de la lumière UV pendant 1 h et du désinfectant médical liquide 84 (la teneur en chlore disponible est de 4,0 % à 5,0 %, tableau des matériaux) avant d’effectuer l’opération.
Après que le porc miniature ait reçu une injection intramusculaire composée de 15 mg/kg de kétamine, de 15 mg/kg de chlorhydrate de xylazine et de 0,05 mg/kg de chlorhydrate de phénacétine (volumes : 100 μL/kg, tableau des matériaux) (Figure 1A), confirmez l'état anesthésique de l'animal en vérifiant le stimulus douloureux porcin (par exemple, pincer une oreille ou secouer un membre antérieur) et l'indice physiologique (par exemple, pression artérielle, fréquence cardiaque et respiratoire).
note: Une autre injection d’une demi-dose pourrait être administrée au porc s’il montre des signes de réveil.
Coupez l’abdomen avec un scalpel, exposez la veine cave inférieure et injectez par conséquent de l’héparine sodique (5 000 U, Table des matériaux) dans la veine cave inférieure avec une seringue de 5 ml.
Cinq minutes plus tard, insérez un cathéter dans l’aorte abdominale pour le sang, coupez la peau du thorax et incisez le diaphragme avec un scalpel, puis coupez le ventricule gauche.
note: Assurez-vous que le porc est euthanasié en vérifiant le pouls aortique après avoir saigné et coupé le cœur.
Exciser les côtes avec une pince à os (Table des matériaux) et exposer le cœur et les poumons. Trouvez l’aorte postérieure au cœur et aux poumons et clampez les deux extrémités. Lavez l’aorte une fois avec un tampon de lavage pré-refroidi - 1x solution PBS (pH 7,4) avec 1 % (v/v) de pénicilline/streptomycine. (Figure 1B,C).
Découpez l’aorte avec des ciseaux et maintenez l’aorte serrée à chaque extrémité. Exciser l’excès de tissu autour de l’aorte à l’aide d’une pince et de ciseaux stériles. Placez l’aorte dans un tube à centrifuger de 50 ml, lavez-la 3 fois avec un tampon de lavage prérefroidi (30 ml par lavage) et transférez l’aorte au laboratoire (figure 1D).

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Résultats

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Figure 1 : L’intervention chirurgicale et l’excision de l’aorte d’un porc miniature. (A) Photographie d’un cochon miniature (Bama). (B) L’aorte est exposée après une laparotomie et une thoracotomie. (C) L’aorte est serrée à chaque extrémité. (D) L’aorte est placée dans un tube de 50 mL avec un tampon de lavage à froid.