Isolement des cellules endothéliales de l’aorte porcine (pAEC) : une méthode enzymatique pour isoler les cellules endothéliales de l’aorte abdominale porcine prélevée

Résumé

Source : Zhao, Y. et al. Isolement et culture de cellules endothéliales aortiques primaires de porcs miniatures. J. Vis. Exp. (2019)

Dans cette vidéo, nous démontrons l’isolement des cellules endothéliales de l’aorte abdominale d’un modèle porcin en utilisant la digestion de la collagénase en une étape. Les cellules endothéliales peuvent être cultivées pour d’autres applications en aval.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Isolement des cellules endothéliales aortiques porcines

1. Dans des conditions aseptiques, retirer l’aorte du porc du tampon de lavage et la placer sur une boîte de Pétri de 150 mm (figure 1A).
2. Coupez doucement les deux extrémités de l’aorte et excisez l’excès de tissu autour de l’aorte à l’aide d’une pince stérile et de ciseaux (figure 1B). Laver l’extérieur et l’intérieur de l’aorte (au-dessus de la boîte de cultur....

Résultats

Figure 1 : Digestion de l’aorte porcine et isolement des pAEC. (A) L’aorte est placée dans une boîte de Pétri de 150 mm avec un tampon de lavage à froid. (B) Photographie de l’aorte porcine après l’ablation des tissus conjonctifs. (C) La barre.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Racleur de cellules	Corning	N° 3010#
Collagénase IV	Sigma-Aldrich	Réf. C5138#-1G
DMEM	Technologies de la vie	11965118#
Antenne parabolique de culture cellulaire Falcon 100mm	Corning	353003#
Boîtes de Pétri (150 x 15 mm)	Biologixgroup	66-1515#
forceps	ShangHai medical instruments Co., Ltd.China
Fiole de culture cellulaire rectangulaire à col incliné avec capuchon d’aération (T25)	Corning	Réf. 3289#
ciseaux	ShangHai medical instruments Co., Ltd.China
Pipettes de transfert sérologique (10ml)	JET Biofil	GSP010010#
Pipette Pasteur stérile	GeneBrick (en anglais)	GY0025#
Suture chirurgicale	Shanghai Pudong Jinhuan Medical Supplies Co., Ltd	5-0#
20 x solution PBS (pH 7,4, sans nucléases)	Sangon Biotech	B540627#
Pénicilline/streptomycine	Technologies de la vie	15070063#