Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Préparation du lapin pour la chirurgie
- Anesthésier le lapin à l’aide de 20 à 40 mg/kg de kétamine et de 2 mg/kg de midazolam par injection sous-cutanée. Placez le lapin sur 1,5 % à 3 % d’isoflurane (généralement 2 %) tout au long de la sédation initiale à l’aide d’un masque. Administrer une injection d’alfaxalone pour maintenir l’anesthésie par injection intramusculaire de 3 mg/kg.
- Une fois anesthésié, retirez le masque et insérez un tube endotrachéal à ballonnet dans les voies respiratoires et connectez-vous à un ventilateur. Continuer à administrer l’isoflurane à raison de 1,5 % à 3 %.
- Prélevez du sang de l’artère centrale de l’une ou l’autre oreille pour un panel de chimie de base.
- Placez un cathéter veineux auriculaire de 22 G dans la veine latérale de l'oreille pour l'écoulement de la solution de sonnerie lactée tout au long de l'intervention chirurgicale. Alternativement, une solution saline normale (chlorure de sodium à 0,9 %) peut être utilisée.
- À l’aide de la veine latérale de l’oreille opposée, placez un cathéter dans la veine et administrez l’alfaxalone à 6 mg/kg/h. Augmentez progressivement l’alfaxalone à 8 mg/kg/h tout en diminuant l’isoflurane à 0,6 % pendant la période de préparation.
- Pour limiter la douleur et le risque d’infection, administrer de la buprénorphine (0,01 mg/kg) et de l’enrofloxacine (5 mg/kg) par injection sous-cutanée avec une aiguille de 25 G.
- Coupez les poils du cou, de l’intérieur des cuisses droite et gauche et du dos à l’aide d’une tondeuse (lame #40). Les poils sont retirés du dos pour maintenir le contact avec le tampon de mise à la terre.
- Placez un brassard de tensiomètre sur chacun des membres postérieurs et mesurez la pression artérielle initiale. Placez le brassard juste en dessous du genou avec la sonde juste au-dessus du jarret sur la surface latérale.
- Placez le lapin sur la table d’opération sur le dos et frottez et drapez les sites de chirurgie. Cela comprend le cou pour l’accès à l’artère carotide et l’intérieur de la cuisse droite pour l’accès à l’artère fémorale. Effectuez le gommage de stérilisation en alternant les gommages de chlorhexidine à 2 % et d’alcool éthylique à 70 %. Répétez l’opération trois fois, puis appliquez une dernière pulvérisation avec une solution de chlorhexidine à 2 %.
- Placez une boule en acier inoxydable de 3 mm qui a été stérilisée à l’intérieur d’un sac en polyéthylène basse densité sur le dessus de la jambe droite (frottée) près de la partie supérieure de la cuisse pour servir de référence de taille lors des mesures d’angiographie. Placez un champ stérile sur la jambe jusqu’au moment de la chirurgie. Laissez la balle à l’intérieur du sac en plastique stérile lors de la première angiographie.
2. Angiographie
- Exposer l’artère carotide commune droite
- Faites une incision de 4 à 5 cm de long juste latéralement à la trachée à l’aide d’un scalpel avec une lame #15.
- Utilisez la dissection émoussée pour exposer l’artère carotide et ouvrir l’incision à l’aide de petits écarteurs Weitlaner. Isolez soigneusement l’artère carotide de la veine jugulaire et du nerf vague. En règle générale, des ciseaux Metzenbaum incurvés et un hémostat anti-moustique incurvé sont utilisés pour la dissection contondante. Assurez-vous d’obtenir une séparation complète de l’artère carotide du nerf et de la veine jugulaire pour que les ligatures ne ligaturent que l’artère.
- Placez une ligature à l’aide d’une suture en soie 4-0 aux extrémités proximale et distale de l’artère exposée. Attachez l’extrémité distale de la carotide à l’aide d’un nœud de chirurgien suivi de quatre nœuds carrés. À l’extrémité proximale, utilisez une ligaloop pour permettre de la resserrer ou de la desserrer au besoin. L’utilisation d’un ligaloop placé à l’extrémité proximale de l’artère exposée peut aider à sécuriser l’introducteur et le cathéter.
- Administrer 500 UI d’héparine par voie intraveineuse. Utilisez environ 0,5 mL de lidocaïne à 1 % appliqué le long de la carotide exposée pour dilater le vaisseau. Un traitement est généralement suffisant, mais il peut être répété au besoin. Coupez environ la moitié de l’artère carotide à l’aide d’un scalpel ou de ciseaux à iris, puis placez l’outil d’insertion de fil de 4 pouces dans l’artère.
- Faites passer un fil-guide de 0,014 pouce x 185 cm à travers l’outil d’insertion jusqu’à la bifurcation aortique au niveau de la crête iliaque dans l’aorte descendante. Retirez l’outil d’insertion et insérez un cathéter angiographique en queue de cochon 3F sur le fil.
- Avancez le cathéter en queue de cochon pour qu’il soit à 2 cm proximal de la bifurcation aortique au niveau de la crête iliaque dans l’aorte descendante.
- Positionnez l’extrémité du cathéter entre la septième vertèbre lombaire et la première vertèbre sacrée. Testez l’emplacement du cathéter en injectant manuellement de 2 à 4 ml d’agent de contraste.
- Administrer une injection intra-artérielle de 100 μg de nitroglycérine à travers le cathéter pour augmenter la vasodilatation.
- Administrer 0,8 mL de lidocaïne à 1 % au lapin par le cathéter pour aider à la vasodilatation pendant l’angiographie. Fixez le tube de l’injecteur au cathéter et retirez toutes les bulles d’air dans la conduite. Injecter 8 à 9 ml de produit de contraste à l’aide d’un injecteur angiographique automatisé à travers le cathéter.
- Enregistrez des images en série des membres postérieurs à l’aide de l’angiographie.
- Réglez l’injecteur de puissance pour injecter un produit de contraste à 3 ml/s pour un total de 8 à 9 ml. Effectuez une angiographie par soustraction numérique à 6 images par seconde.
- Sélectionnez les images en série créées et modifiez une photo de chaque angiographie en utilisant le réglage d’environ -40 % pour minimiser l’apparence de l’os et capturer une image complète de la perfusion du vaisseau avec contraste. La figure 1 montre un exemple d’angiographie du flux vasculaire après ligature/exérèse de l’artère fémorale.
