Génération d’un modèle de défaut calvarial de lapin : une procédure chirurgicale pour créer des défauts ronds dans la partie supérieure du crâne de lapin afin d’évaluer les matériaux de substitution osseuse pour les capacités de régénération osseuse

Résumé

Source : Marger, L. et al., calvarial d’augmentation osseuse chez le lapin pour l’évaluation de la croissance osseuse et de la néovascularisation dans les matériaux de substitution osseuse. J. Vis. Exp. (2019).

Dans cette vidéo, nous décrivons l’intervention chirurgicale pour générer un modèle calvaire de lapin afin d’évaluer les capacités de régénération osseuse des matériaux de substitution d’échantillons osseux d’intérêt.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Chirurgie

1. Préparation du site
   1. Placez le lapin sur un coussin chauffant (39 °C) recouvert d’un matelas (pour éviter les brûlures) sur la table d’opération. Rasez le cuir chevelu.
   2. Appliquez un gel lubrifiant sur les yeux pour éviter les irritations et le dessèchement. Désinfecter le site en frottant la peau avec de la povidone iodée (10 %). Ensuite, drapez le lapin avec un champ chirurgical stérile et découpez une zone d’accès pour le crâne.
   3. Désinfectez le site chirurgical avec de la povidone iodée (10 %) une deuxième fois. Appliquez un gel lubrifiant sur les yeux pour éviter les irritations et le dessèchement.
   4. Préparez une table drapée (champ stérile) sur laquelle placer le plateau chirurgical complet.
2. Ouverture du site chirurgical
   1. Anesthésier localement par une injection sous-cutanée (SC) de lidocaïne à 2 % (1 ml) sur le crâne.
   2. Inciser à travers la peau (avec un scalpel) le long de la ligne sagittale calvaire, des orbites à la protubérance occipitale externe (~4 cm de longueur). Veillez à ce que le périoste soit incisé.
   3. Élevez doucement le périoste (à l’aide d’un élévateur périosté) des deux côtés de l’incision. Rincez le site avec une solution saline stérile.
3. Placement des cylindres
   1. Localisez les sutures médiane et coronale sur le crâne (Figure 2A, B). Notez que ces lignes anatomiques forment une croix. Les cylindres seront placés dans chacun des quadrants définis par la croix, en veillant à ce que le bord du cylindre ne dépasse pas la suture (Figure 2C).
   2. Placez le premier cylindre sur le quadrant supérieur gauche (os frontal gauche) et essayez de poser l’appareil à plat. Fixez en position avec une forte pression de la main et vissez une micro-vis, jusqu’à ce qu’une résistance se fasse sentir. Assurez-vous que la tête de la vis affleure la surface de la languette du cylindre.
   3. Répétez la même procédure sur l’autre languette pour fixer fermement le cylindre sur le crâne. Assurez-vous que le cylindre est hermétiquement fixé à l’os.
   4. Répétez la procédure sur le quart supérieur droit (os frontal droit), le quart inférieur gauche (os pariétal gauche) et le quartier inférieur droit (os pariétal droit).
4. Perçage osseux de 5 trous intramédullaires dans la zone circonscrite par les cylindres (Figure 1)
   1. Percer un trou intramédullaire sous irrigation saline (0,8 mm de diamètre, ~1 mm de profondeur) avec une fraise ronde sur l’os, au centre de la zone circonscrite par le cylindre. Assurez-vous qu’un saignement apparaît.
   2. Percez deux autres trous intramédullaires le long de l’axe passant à travers les deux vis à languette, sur les bords intérieurs du cylindre. Le long de l’axe perpendiculaire, percez deux autres trous intramédullaires sur les bords intérieurs du cylindre. Assurez-vous qu’un saignement apparaît.
   3. Répétez l’opération à l’intérieur des trois autres cylindres.
5. Remplissage des cylindres avec des échantillons de matériaux et bouchage (Figure 3)
   1. Préparez le matériau de substitution osseuse souhaité selon les instructions du fabricant ou les spécifications du matériau.
   2. Remplissez le premier cylindre à ras bord avec l’échantillon de matériau et fermez le cylindre en ajustant le bouchon. Répétez le processus dans les 3 autres cylindres.
6. Fermeture du site chirurgical
   1. Fermez la peau au-dessus des cylindres avec une suture intermittente non résorbable.
   2. Appliquez un pansement pulvérisable sur la plaie.

2. Traitement post-chirurgical

1. Arrêter l’apport d’analgésie et d’anesthésie (arrêt de perfusion de propofol et fentanyl) et vérifier la récupération de la respiration autonome.
2. Arrêtez la ventilation une fois que l’animal a récupéré sa respiration autonome. Maintenez l’animal sous oxygène pur avant le réveil complet.
3. Injecter du chlorhydrate de buprénorphine SC (0,02 mg/kg, 0,03 mg/mL, 0,67 mL/kg) et répéter l’injection toutes les 6 h pendant 3 jours comme analgésie post-chirurgicale.
4. Transférez l’animal dans son logement habituel avec de l’eau et une alimentation complète.

Résultats

Figure 1 : Spécifications des cylindres PEEK. Deux trous (0,8 mm de diamètre) ont été percés sur les languettes stabilisatrices latérales pour le vissage. Les positions des 5 trous intramédullaires (0,8 mm de diamètre) à percer sur le crâne à l’intérieur de la zone délimitée par le cylindre sont marquées par des cercles rouges.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Drogues
Fentanyl	Bischel		Pour l’analgésie
Ketalar 50mg/ml	Pfizer		La kétamine pour l’anesthésie
Lidohex	Bichsel		Gel lubrifiant pour les yeux
Opposition	Smith et son neveu	66004978	Pansement pulvérisable
Povidone iodée 10 %, bétadine	Mundipharma		agent anti-infectieux
Propofol 2 %	Braun	3538710	Pour l’anesthésie
Rapidocaïne 2 %	sintetica		Anesthésie locale
Rompun 2 %	Bayer		Xylazine pour l’anesthésie
Sévoflurane 5 %	Abbvie		Pour l’anesthésie
équipement
Fresenius Vial pilote C	Imexmed		Pompe à perfusion
Coussin chauffant	Appareil de Harvard
Aspiration dominante 50	Médéla
Tubulure d’aspiration Optimus	Promédical	Référence 80342.2
Moteur chirurgical	Schick dentaire	Qube	Perçage de trous intramédullaires
Ventilation	Maquet Servo1
matériel
Cylindres et bouchons	Boutyplast	Personnalisé	composition : PEEK (poly éther éther cétone)
Arbre auto-retenant manuel	GlobalD	ACT1K
Poignée mobile pour arbre auto-bloquant	GlobalD	Mtm
Vis autoperceuses	GlobalD	VA1.2KL4	vis cruciformes composées de titane grade 5, ISO 5832-3
Plateau chirurgical
Sonde endotrachéale Shiley diamètre 2,5mm	Covidien	Référence 86233	Pour l’intubation
Sonde endotrachéale Shiley diamètre 4,9mm	Covidien	107 à 35 g	Pour l’intubation
Ethicon prolene 4-0	Ehticon	8581H	Suture non résorbable
forceps	Marcel Blanc	BD027R	145 millimètre
Cathéter d’intubation	Cuisinier médical		Guide d’intubation
Foutaises chirurgicales rondes	Patterson	Référence 78000	0,8 mm de diamètre, Perçage de trous intramédullaires
scalpel	Swann-Morton		n°10 et n°15
ciseaux	Marcel Blanc	657	180 millimètre
Seringues Omnifix	Braun	Réf. 4616057V	5ml, 10ml et 50ml
Venflon G22	Braun	Référence 42690985-01	Sécurité Vasofix pour la ligne intra-auriculaire