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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Isolement des artères ciliaires postérieures courtes
Les yeux porcins ainsi que le nerf optique et les tissus extraoculaires ont été obtenus immédiatement post-mortem. Les yeux énucléés ont été transportés au laboratoire dans une solution saline tamponnée au phosphate (PBS) glacée et utilisés immédiatement.
REMARQUE : L’œil porcin est essentiellement divisé en sections antérieure (Figure 1A) et postérieure (Figure 1B).
- Placez le globe oculaire dans une chambre de dissection contenant un tampon Krebs-Henseleit (K-H) glacé. Coupez soigneusement les muscles et les tissus environnants à l’aide d’une paire de ciseaux Mayo bien aiguisés.
note: Pour préparer le tampon Krebs-Henseleit (K-H), pesez les produits chimiques suivants (27,68 g de NaCl, 8,4 g de NaHCO 3,1,4 g de KCl, 1,18 g de MgSO4 et 0,64 g de KH2PO4) dans un tube à centrifuger conique sec et propre de 50 ml et 1,47 g de CaCl2 et 8,0 g de glucose dans un autre tube. Le mélange de poudre de ces produits chimiques doit être stocké dans un endroit frais et sec. Il est préférable de préparer le mélange de poudre de CaCl2 et de glucose frais pour éviter l’absorption d’humidité et l’agglutination.
- Faites une incision avec un scalpel et coupez le globe le long du plan équatorial avec une paire de ciseaux Mayo tranchants jusqu’à ce que l’œil soit séparé en moitiés antérieure et postérieure. Retirez autant de corps vitré que possible de la moitié postérieure de l’œil à l’aide d’une paire de pinces à motif standard.
note: La séparation du globe oculaire en deux moitiés facilite l’isolement des artères ciliaires postérieures courtes (sPCA) sans avoir d’œil en mouvement dans la boîte de dissection. Cependant, cette étape n’est pas obligatoire. Les vaisseaux peuvent également être isolés sans ouvrir le globe oculaire.
- Utilisez des broches de dissection pour épingler soigneusement la moitié postérieure de l’œil avec la rétine vers le bas et le nerf optique vers le haut vers l’expérimentateur.
- Coupez doucement les tissus conjonctifs entourant le nerf optique pour exposer le système vasculaire rétrobulbaire sous-jacent avec une paire de ciseaux à ressort Student Vannas.
- La sPCA peut être considérée comme de courtes branches de vaisseaux (entre 5 et 8 branches) qui pénètrent dans la sclérotique et entourent circonférentiellement la tête du nerf optique (Figure 1C). Isolez l’APC paraoptique et distale ainsi que les tissus conjonctifs environnants à l’aide d’une pince à épiler de précision de type 5 et de ciseaux de capsulotomie Vannas (Figure 1D).
note: Assurez-vous que la mémoire tampon K-H reste glacée tout au long de la procédure d’isolement. Il est fortement recommandé de changer le tampon toutes les 20 à 30 minutes, en fonction de la température ambiante.
2. Préparation des échantillons
- Retirez délicatement les tissus conjonctifs des segments artériels à l’aide d’une pince à épiler de précision de type 5 à pointe très fine et de ciseaux de capsulotomie Vannas sous un stéréomicroscope et rincez les artères isolées dans un PBS glacé pour éliminer les contaminants et les résidus sanguins.
note: Si les échantillons ne sont pas soumis immédiatement aux étapes suivantes, congelez-les dans de l’azote liquide et conservez-les à -80 °C jusqu’à une nouvelle utilisation.
