Décongélation d’embryons de lapin : une procédure de réchauffement pour récupérer des embryons de lapin cryoconservés pour le transfert d’embryons

Résumé

Source : Garcia-Dominguez, X. et al., Transfert d’embryons mini-invasif et vitrification embryonnaire au stade optimal de l’embryon dans le modèle de lapin. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre la procédure de décongélation des embryons de lapin vitrifiés et les étapes de mesure de précaution pour une récupération optimale des embryons.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Réchauffement de l’embryon

1. Décongelez les embryons en une seule étape.
   1. Placez la minipaille horizontalement à 10 cm de la vapeur d’azote liquide pendant 20-30 s.
   2. Lorsque le processus de cristallisation commence à l’intérieur de la minipaille, plongez-la dans un bain-marie à 25°C pendant 10-15 s.
   3. Retirez le bouchon ministraw et coupez le coton.
   4. À l’aide d’un microdistributeur couplé, expulser tout le contenu de la minipaille dans une plaque contenant une solution de saccharose 0,33 M à 25°C dans BM pendant 5 minutes.
      note: Cette étape doit être effectuée rapidement afin de réduire l’exposition de l’embryon à la solution de vitrification.
   5. Déplacez les embryons dans une nouvelle plaque contenant une solution de BM pendant encore 5 min.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
azote liquide	Air Liquide	P1505XXX
Boîtes de Pétri, 35 mm	Sigma Aldrich	CLS430165-500EA
Pansement en plastique (Nobecutan)	IBOR medica	7140028
Paille en plastique 0,25 mL	IMV - les technologies	Référence 6431
ciseaux	ROBOZ	RS-5880	N’importe quel petit ciseau droit en acier de qualité chirurgicale ordinaire fera l’affaire.
Gants stériles	Alvet Escartí	Référence 087GL010075
Blouse stérile	Alvet Escartí	12261501
Masque stérile	Alvet Escartí	Référence 058B15924B
Bouchon de paille	IMV - les technologies	Référence 6431
saccharose	Sigma Aldrich	S7903
Bain d’eau	RAYPA	BAE-4
Solution saline tamponnée au phosphate de Dulbecco (DPBS)	Sigma Aldrich	D5773	Sans chlorure de calcium.