Inactivation du gène cible basée sur le système CreER-LoxP : un système de cre recombinase inductible par le tamoxifène pour l’inactivation d’un gène cible dans un modèle murin

Résumé

Source : Hubner, E. K., et al. Systèmes constitutifs et inductibles pour la modification génétique in vivo des hépatocytes de souris à l’aide de l’injection hydrodynamique de la veine de queue.J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo décrit une procédure d’inactivation du gène cible à l’aide d’un système de cré-recombinase inductible par le tamoxifène après injection intrapéritonéale de tamoxifène dans un modèle murin.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Induction de CreER transfecté avec du tamoxifène

ATTENTION : Le tamoxifène est nocif, peut être cancéreux ou nuire à la fertilité. Veuillez vous référer à la fiche de données de sécurité.

1. Prévoyez des injections intrapéritonéales de tamoxifène sur trois jours consécutifs.
2. Le jour 1, dissoudre 10 mg de tamoxifène dans 40 μL d’éthanol. Incuber à 55 °C pendant 10 min. Agitez plusieurs fois jusqu’à ce que le tamoxifène soit dissous.
3. Ajouter 960 μL d’huile de maïs. Incuber pendant 5 minutes à 55 °C. Vortex plusieurs fois pour obtenir une solution claire.
4. Préparez la solution dans une seringue à insuline de 1 mL à l’aide d’une aiguille de 27 G.
5. Ébouriffez la souris en saisissant soigneusement le cou de la souris avec le pouce et le deuxième doigt, en fixant la queue entre la base de la main et le quatrième et le cinquième doigt.
6. Injecter 0,1 mL (= 1 mg de tamoxifène) de la solution par voie intrapéritonéale dans le quadrant inférieur gauche de l’abdomen.
7. Répétez les injections les deuxième et troisième jours.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Seringue Injekt F 1 ml	Braun	Référence 9166017V	Pour l’injection intrapéritonéale
Tamoxifène	Sigma-Aldrich	Réf. T5648-1G	Pour l’activation de CreER
Huile de maïs	Sigma-Aldrich	Réf. C8267-500ML	Support pour injections de tamoxifène