Techniques d'édition du génome

Cette vidéo explique le concept des éditeurs de bases de cytosine médiés par CRISPR pour induire une substitution nucléotidique ciblée.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’édition du génome tout-en-un basée sur CRISPR-Cas9 dans des cellules en culture où Cas9 et l’ARNsg sont fournis en tant que construction plasmidique unique aux cellules. Le système CRISPR-Cas9 et le gène souhaité à insérer ont été introduits dans les cellules par technique d’électroporation pour faciliter l’édition de gènes.

Cette vidéo présente une technique d’édition du génome basée sur les nucléases à doigts de zinc dans des cellules souches pluripotentes humaines (hPSC). Comme les hPSC peuvent potentiellement être différenciées en différents types de cellules, cette technologie est utile pour les études pathologiques et pharmacologiques in vitro d’une manière spécifique au patient.

Cette vidéo décrit une technique précise d’édition du génome dans des cellules souches pluripotentes induites humaines, ou hiPSC, à l’aide de TALEN pour créer des cassures double brin au niveau d’un locus ciblé, induisant une réparation dirigée par homologie pour l’intégration des gènes de la protéine de fluorescence.

Dans cette vidéo, nous démontrons l’intégration du transgène spécifique au site médiée par phiC31 dans l’embryon d’Anopheles par microinjection. Cette méthode permet d’introduire les gènes souhaités dans un système hôte pour la recherche et les applications industrielles.

Dans cette vidéo, nous démontrons la génération de plantes transgéniques Arabidopsis exprimant un transgène stable par transformation génique artificielle bactérienne binaire basée sur des chromosomes par Agrobacterium.

Dans cette vidéo, nous démontrons une procédure pour générer une lignée transgénique stable de poisson-zèbre exprimant constitutivement une protéine indicatrice de tension fluorescente suite à la co-injection du système de transposon Tol2 comprenant l’ARNm de la transposase et la construction du transposon Tol2 codant pour l’indicateur de tension fluorescente.

Cette vidéo montre la procédure de génération de motoneurones par transfection d’iPSC humaines avec le système de transposon PiggyBac par l’expression ectopique de facteurs de transcription spécifiques à la lignée.

Cette vidéo démontre un silençage génique basé sur l’interférence CRISPR chez Leptospira pathogène. La répression ciblée de l’expression génique à l’aide d’un système CRISPR/Cas qui bloque la formation d’ARNm permet d’identifier des gènes candidats pour des études pathologiques et pharmacologiques.

Cette vidéo décrit une procédure d’inactivation du gène cible à l’aide d’un système de cré-recombinase inductible par le tamoxifène après injection intrapéritonéale de tamoxifène dans un modèle murin.

Cette vidéo décrit une technique d’inactivation de gènes utilisant un concatéreur CRISPR pour inactiver simultanément plusieurs gènes dans des cellules organoïdes intestinales de souris en culture. Cette méthode est utilisée pour éliminer un gène malade et pour élucider la fonction d’un gène et de ses paramètres.

Dans cette vidéo, nous démontrons une méthode pour effectuer la transduction de vecteurs lentiviraux shRNA afin d’obtenir des lignées cellulaires inactivées stables dans des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques immortalisées (iHSPC).

Cette vidéo démontre le système d’expression génique de la tétracycline, ou Tet-On, dans un modèle murin. En présence de doxycycline, un dérivé de la tétracycline, le système Tet-On constitué de la protéine transactivatrice inverse contrôlée par la tétracycline s’active et exprime le gène d’intérêt.

Dans cette vidéo, nous décrivons une procédure permettant d’effectuer une transfection inverse de siRNA en adipocytes afin de moduler l’expression d’une protéine cible.

Cette vidéo décrit la méthode de régulation de l’expression génique dans les cellules cultivées par transfection avec un plasmide contenant un gène d’intérêt et un plasmide régulateur. L’expression de ce plasmide peut être contrôlée par la tétracycline ou ses analogues synthétiques, ce qui fait de ce système un modèle utile pour étudier l’expression génique régulable.

Cette vidéo décrit une technique d’inactivation génique utilisant des morpholinos bloquant la traduction micro-injectés dans le stade unicellulaire du poisson cavernicole. Les morpholinos sont des oligonucléotides d’ADN qui se lient à la séquence complémentaire de l’ARNm cible et bloquent sa traduction en une protéine. Par conséquent, les morpholinos sont utilisés comme outils moléculaires pour arrêter ou réduire l’expression d’un gène de manière transitoire.