Expression génique inductible basée sur le système régulable Tet-On in vivo : un système d’expression génique induit par la tétracycline pour l’activation de la transcription du gène cible dans un modèle murin

Résumé

Source : Hübner, E. K. et al.Systèmes constitutifs et inductibles pour la modification génétique in vivo d’hépatocytes de souris à l’aide de l’injection hydrodynamique de veine caudale. J. Vis. Exp. (2018)

Cette vidéo démontre le système d’expression génique de la tétracycline, ou Tet-On, dans un modèle murin. En présence de doxycycline, un dérivé de la tétracycline, le système Tet-On constitué de la protéine transactivatrice inverse contrôlée par la tétracycline s’active et exprime le gène d’intérêt.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Induction de l’expression du gène dépendant de la tétracycline ou shRNA

ATTENTION : La doxycycline peut être nocive. Veuillez vous référer à la fiche de données de sécurité.

REMARQUE : Selon le type et la durée de l’expérience, la doxycycline peut être fournie dans l’eau potable.

1. Pour les expériences à court terme (<10 jours), administrer la doxycycline dans l’eau potable en suivant le protocole suivant.
   1. Dissoudre 5 g de saccharose dans 100 mL d’eau du robinet. Autoclave.
   2. Dissoudre 100 mg d’hyclate de doxycycline dans 5 mL de solution de saccharose (étape 1.1.1) dans un tube conique de 15 mL.
   3. À l’aide d’une seringue de 10 mL, filtrer stérilement la solution à travers un filtre de 0,2 μm. Ajouter à la solution de saccharose préparée à l’étape 1.1.1.
   4. Fournir une solution de doxycycline-saccharose sous forme d’eau potable à la souris. Vérifiez quotidiennement et remplacez lorsque la solution devient trouble, indiquant une prolifération bactérienne (remplacez la solution claire au plus tard après trois jours).

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
D(+)-Saccharose	Carl Roth	Réf. 4621.1	Pour l’édulcoration de la solution de doxycyline
Hyclate de doxycycline	AppliChem	N° A2951,0025	Activation de l’expression dépendante de la tétracycline
Seringue Injekt 10 ml	Braun	Réf. 4606108V
Filtropur S 0.2	Sarstedt	Référence 831.826.001	Pour la filtration de la doxycycline