Transformation génique basée sur un vecteur chromosomique artificiel bactérien binaire chez les plantes Arabidopsis : une technique pour générer des plantes transgéniques avec insertion en une seule copie

Abstract

Source : Tark-Dame, M., et al. Génération de plantes transgéniques avec des insertions en une seule copie à l’aide du vecteur binaire BIBAC-GW. J. Vis. Exp. (2018).

Dans cette vidéo, nous démontrons la génération de plantes transgéniques Arabidopsis exprimant un transgène stable par transformation génique artificielle bactérienne binaire basée sur des chromosomes par Agrobacterium.

Protocol

1. Arabidopsis Transformation

1. Préparez les plantes d’Arabidopsis pour la transformation.
   1. Cultivez les plantes d’Arabidopsis dans une serre ou une chambre de culture climatisée jusqu’à ce qu’elles fleurissent (12 pots de 9 plantes chacun par trempage).
   2. Clipsez les premiers boulons pour permettre à d’autres boulons secondaires de sortir. Les plantes sont prêtes à tremper 4 à 6 jours après la coupe, lorsque les plantes ont de nombreux capitules immatures et peu de siliques fertilisés.
2. Trempette florale
   1. Tremper les inflorescences pendant 5 à 10 secondes dans....

Results

Figure 1 : Plateau rempli de semis d’Arabidopsis avant et après le traitement au glufosinate-ammonium. Les plantules qui n’expriment pas le gène bar présent dans l’adn-t pBIBAC-BAR-GW meurent après avoir été pulvérisées avec une solution de glufosinate-ammonium. Les photos montrent le même plateau de semis (A) avant la pulvérisation de glufosinate-ammonium, 14 jours après le semis, et.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Sulfate de kanamycine monohydraté	Duchefa	K0126
Mélange d’enzymes clonases Gateway LR	Thermo Scientific - Invitrogen	Référence 11791-019
Murashige Skoog moyen	Duchefa	Référence M0221
agar-agar	Bd	Référence 214010
Glufosinate-ammonium (Basta)	Bayer	79391781
Imageur au phosphore	GE Healthcare Sciences de la vie	Typhon FLA 7000
film alimentaire (Saran wrap)	Omnilabo	1090681
Agarose	Thermo Scientific - Invitrogen	N° 16500