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Édition de gènes médiée par Morpholino : une technique d’inactivation de gènes utilisant des oligonucléotides Morpholino bloquant la traduction dans des œufs de poissons cavernicoles unicellulaires

8 juillet 2025

Dans cet article

Résumé

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Source : Stahl, B. A. et al., Manipulation de la fonction des gènes chez le poisson cavernicole mexicain. J. Vis. Exp. (2019).

Cette vidéo décrit une technique d’inactivation génique utilisant des morpholinos bloquant la traduction micro-injectés dans le stade unicellulaire du poisson cavernicole. Les morpholinos sont des oligonucléotides d’ADN qui se lient à la séquence complémentaire de l’ARNm cible et bloquent sa traduction en une protéine. Par conséquent, les morpholinos sont utilisés comme outils moléculaires pour arrêter ou réduire l’expression d’un gène de manière transitoire.

Protocole

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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Conception de l’oligo morpholino

REMARQUE : Les séquences d’A. mexicanus sont disponibles via le gène du National Center of Biotechnology Information (NCBI) et le NCBI SRA (https://www.ncbi.nlm.nih.gov), ainsi que dans le navigateur de génome Ensembl (https://www.ensembl.org). Lors de la conception d’un morpholino pour une utilisation à la fois dans les formes de surface et dans les grottes, il est es....

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Déclarations de divulgation

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Aucun conflit d’intérêts n’a été déclaré.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article
NomEntrepriseNuméro de catalogueCommentaires
Élevage de poissons et approvisionnement en œufs
Résille de pêche à mailles fines Penn Plax BN4
Chauffage d’aquarium Aqueon 100106108
Pièges à œufs Sur mesure Na Concevez et créez une grille en plastique à placer au fond du réservoir pour protéger les œufs
Pipettes en verre Fisher Scientific 13-678-20C
Ampoules de pipette Fisher Scientific Tél. : 03-448-21
Agarose Fisher Scientific BP160-500
Moules à œufs Outils de science adaptative TU-1
Fournitures Morpholino
Contrôle Morpholino Gene Tools, LLC Olio de contrôle standard
Morpholino personnalisé Gene Tools, LLC Na
Rouge phénol Sigma Aldrich P0290-100ML
Fournitures de micro-injection
Tubes capillaires en verre Instruments Sutter Réf. BF100-58-10
Extracteur de pipette Instruments Sutter P-97
Pico-injecteur Warner Instruments PLI-100A
Micromanipulateur Instruments de précision mondiaux M3301R
Micromanipulateur Stand World Instruments de précision M10
Base de manipulateur de micro Instruments de précision mondiaux Base en tôle d’acier, 10 lb
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Mots-clés

Morpholino OligonucleotidesGene Knockdown TechniqueTranslational BlockingCavefish EggsMicroinjection ProcedureYolk Sac InjectionMorpholino HybridizationTranslation InhibitionSingle Celled EggsPicoliter Microinjector

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