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1. La méthode de la capsule pour l’inactivation en bioconfinement avec 2 % de glutaraldéhyde, suivie d’une coloration négative dans un laboratoire BSL-2
- Procédure d’inactivation du virus.
- À l’intérieur de l’ESB de bioconfinement, bien mélanger la suspension virale avec le même volume de glutaraldéhyde à 4 % pour obtenir une concentration finale de 2 % de glutaraldéhyde.
prudence: Le glutaraldéhyde est un produit chimique dangereux qui nécessite une protection appropriée. Le glutaraldéhyde peut être utilisé pendant de brèves périodes dans une ESB normale, mais un réactif ouvert prolongé nécessite de travailler dans une ESB canalisée ou une hotte chimique.
- Inactivez les virus avec un fixateur pendant au moins 24 heures avant l’emballage, la décontamination et transférez-les à l’installation BSL-2 EM.
- Dans l’installation BSL-2 EM, aspirer le virus et le mélange fixateur dans la capsule, contenant deux grilles TEM, fixée à une pipette.
- Placez la pipette horizontalement pendant 10 min avec les grilles orientées horizontalement.
note: Il s’agit de favoriser une répartition uniforme des particules virales sur les grilles TEM.
- Prenez la pipette et appuyez sur le piston pour expulser le virus dans un conteneur à déchets. Aspirez 40 μL d’eau dI dans les capsules et expulsez-la dans le conteneur à déchets pendant 3 cycles de rinçage.
- Aspirer 40 μL d’acétate d’uranyle à 1 % (UA) ou d’acide phosphotungstique (ATP) de potassium à 1 % dans les gélules pour 30 s.
note: Le temps de coloration variait de 10 s à 1 min selon l’échantillon de virus.
prudence: L’UA est un émetteur alpha et une toxine cumulative. Manipulez-le avec une protection appropriée.
- Retirez la capsule de la pipette et séchez les grilles en touchant le bord des grilles sur un morceau de papier filtre. Faites sécher les grilles à l’air libre et stockez-les pour l’imagerie TEM ultérieure.