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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Coloration au bleu de toluidine
- Préparez une solution à 1 % de bleu de toluidine en dissolvant 2 g de borate de sodium dans 100 ml d’eau désionisée, puis ajoutez 1 g de bleu de toluidine et remuez jusqu’à dissolution. Filtrez la solution à l’aide d’un papier filtre (taille des pores : 11 μm) et conservez la solution dans un flacon opaque à température ambiante jusqu’à deux semaines.
- À l’aide d’une pipette en plastique ou d’un micro-pipeteur, ajoutez une goutte de solution de bleu de toluidine sur le dessus des sections nerveuses et laissez agir pendant 20 à 30 s.
- Rincez tout l’excès de solution de bleu de toluidine en trempant doucement les lames dans un bocal d’eau désionisée et répétez l’opération 3 à 4 fois jusqu’à ce que les sections soient claires. Faites sécher les lames au moins 15 min à 60 °C ou toute la nuit à température ambiante, puis recouvrez les sections d’une lamelle à l’aide d’un support de montage ordinaire. Examinez immédiatement les lames montées ou conservez-les à température ambiante.
- Examinez au microscope optique. Un objectif à immersion dans l’huile 100X est recommandé pour les images détaillées utilisées pour calculer les rapports g.