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Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.
1. Coloration et tranchage du cerveau
- Après l’expérience d’occlusion de l’artère cérébrale moyenne, retirez le cerveau, y compris le tronc cérébral, du crâne et lavez-le dans du PBS glacé.
- Choisissez la bonne taille de la matrice en acier inoxydable du cerveau (voir le tableau des matériaux) en fonction du poids des animaux (Figure 1B). Placez le cerveau avec sa face ventrale vers le haut dans la matrice cérébrale.
note: Lorsqu'il est assis dans la matrice, la surface ventrale du cerveau doit être parallèle à la surface supérieure du moule.
- À l’aide de lames, limitez les parties frontale et caudale (2 lames des deux côtés) du cerveau.
note: Des lames de rasoir compatibles avec la matrice de tranchage doivent être utilisées. En général, une lame de rasoir compatible à un seul tranchant (épaisseur allant jusqu’à 0,01 pouce (0,254 mm)) peut être utilisée pour trancher la cervelle du rat.
- Mettez les lames partiellement (sans couper complètement le cerveau) dans les canaux entre la première et la dernière lame. Lorsque toutes les lames sont insérées et disposées en parallèle, appuyez sur toutes les lames avec la paume en même temps pour couper le cerveau en tranches coronales de 2 mm.
- Saisissez fermement les lames sur les côtés avec deux doigts et retirez-les avec la cervelle tranchée de la matrice.
- Disposez les tranches de cervelle une à une dans un plateau (70 ml, 72 x 72 mm). Lorsque vous disposez les tranches, assurez-vous que la surface antérieure de chaque tranche est toujours tournée vers le haut.
- Verser une solution tiède (+37 °C) de TTC à 1 % dans du PBS sur les tranches de cerveau et les incuber pendant 8 min à 37 °C dans l’obscurité.
note: Les tranches de cerveau doivent être complètement immergées dans la solution TTC pendant l’incubation.
- Après l’incubation dans une solution à 1 % de TTC, transférez les tranches de cerveau dans le plateau en plastique bleu pour capturer des images. Disposez les tranches de cerveau dans un ordre séquentiel de la partie frontale à la partie caudale et utilisez un scalpel pour séparer les hémisphères dans le plan sagittal.
