Coloration de Papanicolaou : une technique pour visualiser les caractéristiques cytologiques des cellules tubaires

Résumé

Source : Chen, H. et al. Cytologie tubaire de la trompe de Fallope comme outil prometteur pour la détection précoce du cancer de l’ovaire. J. Vis. Exp. (2017).

Dans cette vidéo, nous démontrons un protocole modifié de coloration de Papanicolaou pour étudier la cytologie tubaire. Cette technique peut être utilisée pour visualiser les caractéristiques cytologiques des cellules épithéliales malignes et non malignes des trompes de Fallope.

Protocole

1. Protocole de coloration de Papanicolaou modifié

1. Colorer les lames frottées de tissu en exécutant la procédure automatisée de coloration non gynécologique, comme illustré dans le tableau 1.
   REMARQUE : La méthode de coloration représente une modification de la technique de coloration de Papanicolaou que nous utilisons régulièrement pour les échantillons non gynécologiques. Nous utilisons un processeur de tissus automatisé pour colorer certaines lames. Dans cette étude, nous avons choisi la procédure de coloration non gynécologique plutôt que la procédure de coloration gynécologique. L’éosine utilisée est l’EA-65, au lieu de l’EA-50 utilisé pour les échantillons gynécologiques (frottis). De plus, l’OG-6 dans la procédure de coloration gynécologique, qui est principalement destinée à la coloration des cellules squameuses, n’est pas inclus dans la procédure de coloration car aucune cellule squameuse ne devrait être observée dans cette étude. EA65 (Eosin Azure) est une solution de contre-coloration composée de 3 colorants : Eosin Y, Fast green FCF et Bismarck brown Y. La procédure est illustrée dans le tableau 1.
2. Effectuez une procédure manuelle de coloration rapide comme suit :
   1. Trempez la lame de tissu enduite dans de l’éthanol à 95 %, 10 fois, chaque trempage prenant environ 1 s.
   2. Trempez la diapositive dans H₂O, 10 fois, chaque trempage prenant environ 1 s.
   3. Faire émerger la lame dans de l’hématoxyline pendant 10 à 60 s.
   4. Trempez la diapositive dans H₂O, 10 fois, chaque trempage prenant environ 1 s.
   5. Trempez la diapositive dans de l’éthanol à 95 %, 10 fois, chaque trempette prenant environ 1 s.
   6. Faites émerger la diapositive dans EA65 pendant 1 à 3 min.
   7. Trempez la diapositive dans H₂O, 10 fois, chaque trempage prenant environ 1 s.
   8. Trempez la diapositive dans de l’éthanol à 95 %, 10 fois, chaque trempette prenant environ 1 s.
   9. Trempez la lame dans du xylène jusqu’à ce qu’elle devienne claire.
      REMARQUE : Il s’agit d’une procédure de coloration de Papanicolaou modifiée. Cette méthode est utilisée comme méthode de coloration plus rapide pour les cas avec peu de temps ou d’espace, comme l’aspiration à l’aiguille fine sur site et les échantillons STAT. Cette procédure permet d’obtenir une coloration de qualité comparable à celle de la procédure automatisée de coloration non gynécologique. La procédure est illustrée dans le tableau 2.

Tableau 1 : Étapes de la coloration non gynécologique.

95 % d’éthanol	Durée : 5 minutes
H2O	10 secondes
hématoxyline	15 secondes à 3 minutes
H2O distillé	Durée : 5 minutes
95 % d’éthanol	30 secondes
EA65	De 2 à 5 minutes
95 % d’éthanol	30 secondes
95 % d’éthanol	30 secondes
100 % éthanol	30 secondes
100 % éthanol	30 secondes
xylène	30 secondes
xylène	Durée : 5 minutes

Tableau 2 : Étapes manuelles de coloration rapide de Pap.

95 % d’éthanol	10 trempettes
H2O	10 trempettes
hématoxyline	10 secondes à 1 minute
H2O distillé	10 trempettes
95 % d’éthanol	10 trempettes
EA65	1 à 3 minutes
95 % d’éthanol	10 trempettes
100 % éthanol	10 trempettes
xylène	Tremper jusqu’à ce qu’il soit clair

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Tache de Papanicolaou, EA 65	Sigma Aldrich	HT40432
95 % d’éthanol	Sigma Aldrich	652261
100 % éthanol	Sigma Aldrich	493538
xylène	Sigma Aldrich	214736
hématoxyline	Sigma Aldrich	N° H9627