Coloration trichrome Masson Goldner : une technique pour visualiser le collagène dans les coupes cardiaques pour la détection de la fibrose cardiovasculaire

Résumé

Source : Valentin, J., et al. Quantification histologique de l’infarctus chronique du myocarde chez le rat. J. Vis. Exp.(2016).

Cette vidéo montre la coloration différentielle des fibres de collagène, des noyaux et du cytoplasme dans le tissu cardiaque pour visualiser la croissance fibrotique associée aux pathologies cardiaques.

Protocole

1. Coloration trichrome Masson-Goldner

1. Faites des coupes de tissus à partir de blocs cardiaques inclus dans de la paraffine à l’aide d’un microtome manuel (épaisseur : 5 μm).
2. Colorer une lame de chaque partie du cœur pour chaque rat (3 à 4 sections transversales par lame) avec une coloration trichrome Masson-Goldner.
   1. Faites fondre les lames à 60 °C dans un four. Sous une hotte, déparaffinez-les au xylol deux fois pendant 10 min chacune. Réhydratez-les dans de l’éthanol à 100 %, de l’éthanol à 95 %, de l’éthanol à 70 % et de l’eau distillée pendant 3 minutes chacun.
   2. Fixez-les dans la solution de Bouin pendant la nuit. Ensuite, rincez-les à l’eau courante du robinet pendant 10 à 15 min. Rincez-les à l’eau distillée. Incuber-les dans de l'hématoxyline de Mayer pendant 3 min.
   3. Retirez les lames et laissez-les dans de l’eau distillée pendant 5 min. Ensuite, incubez-les dans de l’acide Fuchsin-Ponceau pendant 5 min. Rincez-les avec de l’acide acétique à 1 % pendant 1 min.
   4. Ensuite, incubez-les dans de l’acide phosphomolybdique Orange G pendant 1 min. Rincez-les avec de l’acide acétique à 1 % pendant 1 min, incubez-les dans un colorant vert clair pendant 10 min et rincez-les à l’acide acétique à 1 % pendant 1 min.
   5. Déshydratez-les dans de l’éthanol à 70 % (30 sec), à 95 % d’éthanol (30 sec) et à 100 % d’éthanol (5 min). Mettez une goutte d’un support de montage résineux sur les sections de tissu, couvrez-les de lamelles et laissez-les sécher.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Hématoxyline de Mayer	MHS32-1L (en	Sigma Aldrich
Acide Fuchsin CI 42685	F8129-50G	Sigma Aldrich
Ponceau Xylidin CI 16150	P2395-25G	Sigma Aldrich
Orange G CI 16230	O3756-100G	Sigma Aldrich
Vert clair CI 42095	L5382-25G	Sigma Aldrich
Xylol	10315083	Honeywell
Éthanol absolu	10303990	Honeywell
Microscope stélogique	Réf. SM2800	Nikon
Formaldéhyde	Référence 99340	Reactolab
Cassette d’encastrement	K113.1	Carl Roth
Logiciel de mesure d’image Bersoft		Bersoft.com	Logiciel sous licence

anglais seulement)