Méthode de double coloration : une technique pour visualiser les interactions plantes-champignons à l’aide de rouge de ruthénium et de bleu de coton lactophénol

Résumé

Source : Marques, J. P. R., et Nuevo, L. G. Méthode de coloration double pour détecter la pectine dans l’interaction plante-champignon. J. Vis. Exp. (2022).

Cette vidéo montre une méthode de double coloration utilisant du rouge de ruthénium et du bleu de coton lactophénol pour visualiser les pectines et les chitines lors des interactions plante-champignon dans une plante de rouille du café. La procédure aide à comprendre les mécanismes de défense des plantes lors d’infections fongiques.

Protocole

1. Procédé de coloration double

1. Commencez par des sections de feuilles ultraminces et incrustées de résine de Coffee arabica cv. Catuaí infectées par la rouille du café. Recouvrez les sections de 2 mL de bleu de coton à 5 % de lactophénol (40 % de glycérol, 20 % de phénol et 20 % d’acide lactique dans de l’eau) et chauffez-les sur une plaque chauffante à 45 °C pendant 5 min (Figure 1A).
2. Retirez l’excédent de colorant en lavant la lame trois fois dans un bécher rempli d’eau distillée (figure 1B-D).
3. Colorer avec 2 mL de rouge de ruthénium à 0,01 % dans l’eau pendant 1 min (figure 1E).
4. Retirez l’excédent de colorant en lavant la lame trois fois dans un bécher rempli d’eau distillée (Figure 1F,G).
5. Mettez une goutte d’eau distillée sur les sections et recouvrez les sections avec une lamelle de 24 mm x 60 mm pour effectuer une analyse par microscopie optique.

Résultats

Figure 1 : Détails des différentes étapes du protocole de double coloration. (A) Recouvrez les sections de gouttes de lactophénol bleu de coton et chauffez les lames sur une plaque chauffante à 45 °C. (B-C) Retirez l’excédent de colorant en les lavant à l’eau distillée. (D) Sections sur les lames de verre après lavage (indiquées par des flèches). (E) Couvrez ...

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
plaque chauffante	Dubesser	SSCD25X30-110 V	Coloration
Coton Bleu Lactophénol	Metaquímica	Référence 70SOLSIG024629	Coloration
microscopie	Zeiss	#490040-0030-000	Capture d’image
Plateau de gobelet de moulage en plastique	Ems	Référence 10176-30	Coloration
Rouge ruthénium	LABHouse	#006004	Coloration
Logiciel Axion Vision	Zeiss	#410130-0909-000	Capture d’image