Coloration polarisée rouge Picrosirius : une technique pour détecter la fibrose dans les coupes de tissu cardiaque à l’aide de la microscopie à fond clair

Résumé

Source : Ku, H. C. et al., Un modèle de remodelage cardiaque par constriction de l’aorte abdominale chez le rat. J. Vis. Exp. (2016).

Cette vidéo décrit la coloration rouge picrosirius des tissus fibrotiques pour détecter un dépôt excessif de collagène dans les coupes de tissu fibreux. La technique de coloration permet d’évaluer l’expression du collagène dans les maladies du tissu conjonctif.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des modèles animaux ont été examinées par le comité institutionnel local de protection des animaux et le comité d’examen vétérinaire JoVE.

1. Quantification de la fibrose tissulaire

1. Placez le tissu cardiaque fixé au paraformaldéhyde sur un dispositif de sectionnement de tissu et coupez des sections de 2 mm d’épaisseur. Placez les sections de tissu dans une cassette d’enrobage. Déshydratez le tissu à travers une série de bains d’alcool gradués (50 %, 75 %, 95 % et 100 % pendant 1 heure chacun).
2. Infiltrer le tissu avec du xylène pendant 1 heure et enfin dans de la cire pendant 1 heure. Placez le tissu infiltré dans une cassette d’enrobage et incorporez-le avec de la cire de paraffine. Conservez les tissus incrustés dans des blocs de paraffine à température ambiante jusqu’au microtoming.
3. Coupez le tissu incrusté en sections de 4 μm d’épaisseur. Placez les sections dans un bain-marie à 45 ºC. Trempez une lame de verre dans le bain-marie en biais et approchez-vous progressivement des bords de la section de paraffine pour permettre une fixation partielle à la lame.
4. Déplacez la glissière dans et hors du bain pour éliminer les poches d’air potentielles sous la section du tissu et pour faciliter une meilleure fixation. Séchez les lames à 37 ºC pendant 1 heure et conservez-les à température ambiante pour la coloration histologique.
5. Mettez le toboggan dans un réservoir. Déparaffiniser la lame avec du xylène pendant 30 minutes et la réhydrater dans de l’alcool dilué séquentiellement (95 %, 75 % et 50 % pendant 3 minutes chacun) et enfin dans de l’eau distillée. Utilisez une solution de rouge picrosirius adéquate pour couvrir complètement les coupes de tissus pendant 1 heure. Rincez les lames dans une solution d’acide acétique à 0,5 % pour deux changements, puis effectuez deux rinçages dans de l’alcool absolu.
6. Faites sécher la glissière à l’air libre et fixez-la dans de la résine synthétique à l’aide d’une lamelle. Photographiez la diapositive dans un champ de lumière visible.
   note: La zone rouge de la photographie montre une zone positive rouge picrosirius sous un microscope à un grossissement de 200X. Calculez le pourcentage de la zone positive rouge picrosirius sur la surface totale, ce qui indique l’étendue de la fibrose.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
paraformaldéhyde	Sigma Aldrich	441244
Picrosirius rouge solution	Abcam	AB150681
Imagequant	Dynamique moléculaire