Coloration rouge du Congo : une technique pour visualiser les dépôts de cellulose dans les coupes de tiges de plantes

Résumé

Source : Pradhan Mitra, P., Loqué, D. Coloration histochimique des éléments secondaires de la paroi cellulaire d’Arabidopsis thaliana. J. Vis. Exp. (2014).

Dans cette vidéo, nous démontrons la méthode de coloration au rouge du Congo pour visualiser les dépôts de cellulose dans les coupes de tiges d’Arabidopsis thaliana.

Protocole

1. Coloration rouge Congo

1. Dissoudre 0,5 g de rouge de Congo dans 100 ml d’eau distillée pour préparer une solution de rouge de Congo à 0,5 %.
2. Transférez les sections de tige dans un tube de microcentrifugation de 2,0 ml. Ajouter 1 ml de la solution rouge congo à 0,5 % dans le tube. Pipetez doucement la solution rouge congo à 0,5 % de haut en bas sans déranger les sections.
   REMARQUE : Veillez à ne pas pipeter les sections dans la pointe de la pipette car cela pourrait endommager les sections.
3. Incuber à température ambiante pendant 10 min et répéter le pipetage. Poursuivre avec 3 minutes d’incubation à température ambiante.
4. À l’aide d’une pipette de 1 ml, prélever 700 μl de solution de rouge congo à 0,5 %. Ajouter 700 μl d’eau distillée pour rincer la solution de rouge congo. Répétez le lavage 3 à 4 fois jusqu’à ce que la solution de lavage soit claire.
5. Utilisez une pipette de 1 ml dont la pointe est coupée de manière à ce que les sections puissent être pipetées facilement et sans dommage. Pipetez doucement des sections dans la pointe et sur une lame de microscope et couvrez-les avec une lamelle. Observez les échantillons sur la lame de microscope sous excitation de lumière bleue à l’aide d’un filtre avec une bande passante de 560/40.
   REMARQUE : Ne stockez pas les sections dans l’eau longtemps avant l’analyse microscopique, car l’eau éliminera le rouge congo en 10 à 30 minutes.

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Rouge Congo	sigma	Réf. C6277	3,3'-[[1,1'-biphényle]-4,4'-diylbis(azo)bis(4-aminonaphtalène-1-sulfonate) disodique [numéro CAS 573-58-0]
Tubes de microcentrifugation (0,6 ml)	Axygen Scientific	Référence : MCT-060-C
Caméra avec puce CCD sans obturateur mécanique	Hamamatsu	Réf. C4742-95
Caméra couleur haute vitesse	QImaging	MicroPublisher 5.0 RTV
Logiciel de l’appareil photo	Dispositifs moléculaires	Version 7.7.0.0 de MetaMorph
Imaginer l’anaylsis	adobe	Photoshop CS4
Verres Micro Cover, Carrés, N° 1	VWR	Référence 48366-067	Les verres de 22 x 22 mm (7/8 x 7/8") sont résistants à la corrosion et uniformément épais et plats. L’épaisseur n° 1 est de 0,13 à 0,17 mm.
Micro-lames givrées, 1 mm	VWR	Référence 48312-003	75 x 25 mm à 1 mm
TX2 Cube de filtre	Leica	11513851/11513885	Filtre utilisé pour l’analyse du rouge Congo avec une bande passante de 560/40.