Électrophorèse sur gel de polyacrylamide de dodécylsulfate de sodium pour l’analyse des protéines : une technique pour séparer et visualiser les protéines en fonction de leur poids moléculaire

1. Séparation et visualisation des agrégats de protéines extraits à l’aide de SDS-PAGE

1. Préparez un gel de polyacrylamide à 12 % de SDS
   1. Pour deux gels de séparation, pipeter 5,1 mL d’eau doublement distillée (ddH₂O), 3,75 mL de Tris-HCl (pH 8,8), 7,5 mL de SDS à 20 % (p/v), 6 mL de solution d’acrylamide/bisacrylamide à 30 % (29:1), 75 mL de persulfate d’ammonium à 10 % p/v et 10 mL de tétraméthyléthylènediamine (TEMED) dans un tube à centrifuger de 15 mL et mélanger doucement sans introduire de bulles d’air. Versez le gel à l’aide d’une pipette de 1 mL à l’intérieur des plaques de verre, en laissant les 2 cm supérieurs libres du mélange. Ajoutez 70 % d’éthanol sur le dessus du gel de séparation et permettez une interface uniforme entre les deux couches.
   2. Après la polymérisation du gel de séparation, préparer le gel d’empilage en pipetant 1,535 mL de ddH₂O, 625 mL de Tris-HCl (pH 6,8), 12,5 mL de SDS à 20 % (p/v), 335 mL de solution d’acrylamide/bisacrylamide à 30 % (29:1), 12,5 mL de persulfate d’ammonium à 10 % p/v et 2,5 mL de TEMED. Retirez l’éthanol des gels de séparation et ajoutez la solution de gel d’empilement. Insérez un peigne avec le nombre de poches souhaité sans introduire de bulles d’air. Laisser polymériser pendant 20-30 min.
2. Chargez 4 μL de chaque échantillon et échelle de protéines dans des puits séparés et faites fonctionner le(s) gel(s) dans le tampon de coulée Tris-Glycine (Tableau 1) à 144 V pendant 45 min à température ambiante.
   note: Arrêtez le gel lorsque la bande de bromophénol est sur le point de migrer hors du gel.
3. Teindre le(s) gel(s) dans une solution Fairbanks A préchauffée (tableau 1) pendant 30 minutes sur une bascule.
4. Décolorer le(s) gel(s) dans une solution Fairbanks D préchauffée (tableau 1) jusqu’à l’arrière-plan désiré (par exemple, toute la nuit) sur un rocker.

Table 1 : Tampon, supports et solutions. Recettes pour le tampon, les supports et les solutions utilisés dans ce protocole.