Test d’impédance basé sur un réseau à trois chambres : une technique d’analyse en temps réel pour évaluer le potentiel invasif des cellules cancéreuses en mesurant l’impédance électrique

Abstract

Source : Sharif, G. M. et al., Détection et capture en temps réel de sous-populations de cellules envahissantes à partir de co-cultures. J. Vis. Exp. (2022).

Cette vidéo décrit un test d’invasion utilisant un réseau à trois chambres basé sur l’impédance électrique. Cette technique mesure le potentiel invasif des cellules cancéreuses sous l’influence de facteurs solubles sécrétés par les cellules stromales résidentes dans les microenvironnements tumoraux.

Protocol

1. Nouvelle conception de la chambre (Figure 1)

1. Ouvrez une nouvelle plaque d’analyseur de cellules à double chambre. Mettez de côté la chambre supérieure avec des électrodes.
2. À l’aide d’une fraiseuse, rasez 2 mm des puits inférieurs en forme de U de la plaque de l’analyseur de cellules.
3. Fixez une membrane en polyéthersulfone (PES) de 2 cm x 7 cm avec des pores de 0,2 μm au fond des puits rasés à l’aide d’un adhésif anti-UV. Prévoyez un temps de séchage de 30 minutes pour vous assurer que la colle est complètement durcie et inerte.
4. À l’aide d’une fraiseuse, découpez deux fentes longitudinales (1,5 mm x 5,6 mm) le long des côtés....

Results

Figure 1 : Images des chambres du réseau et des modifications.

(A) Les trois chambres utilisées pour construire le réseau. Aucune modification n’a été apportée sur la chambre supérieure abritant les électrodes. (B) À partir des puits de la chambre centrale, une hauteur de 2 mm a été rasée et une membrane a été fixée au fond ouvert ;.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0,05 % Trypsine-EDTA	Thermopêcheur	Référence 25300-054
adhésif	Adhésif optique Norland	NOA63
Albumine sérique bovine (BSA)	sigma	A9418
Lève-cellules	Sarstedt	Référence 83.1832
Toxine cholérique de Vibrio cholerae	Thermopêcheur	Référence 12585-014
Plaque CIM	Agilent 5665817001		Plaque d’analyseur de cellules
Collagénase de Clostridium histolyticum	sigma	C0130
DMEM	Thermopêcheur	Référence 11995-065
DMEM-F12	Thermopêcheur	Référence 11875-093
Sérum fœtal bovin (FBS), inactivé par la chaleur	Omega Scientific	FB-12
HEPES	Thermopêcheur	15630106
Sérum de cheval (HS)	Gibco	Référence 16050-122
EGF humain	Peprotech	AF-100-15
Hydrocortisone	sigma	N° H4001
Insuline Transferrine, Sélénium, Éthanolamine (ITSX) (100x)	Thermopêcheur	51500056
Insuline, recombinant humain, solution de zinc	sigma	Référence C8052
Fibroblastes J2	Cellules souches (RRID : CVCL_W667)	Référence 100-0353
LymphoPrep	Cellules souches	Référence 7851	Milieu à gradient de densité pour l’isolement de cellules mononucléaires
Matrigel	Corning	Référence 354230	Matrice de membrane basale
MCFDCIS.com cellules (CCIS)	RRID : CVCL_5552
Cellules MDA-MB-231	RRID : CVCL_0062
fraiseuse			Bridgeport Série 1 Vertical
Solution saline tamponnée au phosphate (1x)	Thermopêcheur	10010049
Membrane en polyéthersulfone (PES)	Sterlitech	PCTF029030
Solution de lyse des globules rouges	Cellules souches	N° 7800
Analyseur RTCA DP	Agilent	3X16	Analyseur de cellules à double usage
trypsine	sigma	Réf. T4799