Test d’hémolyse : une méthode in vitro pour mesurer la lyse induite par l’ionophore de calcium dans les érythrocytes humains

Résumé

Source : Bigdelou, P. et al., Induction de l’éryptose dans les globules rouges à l’aide d’un ionophore calcique. J. Vis. Exp. (2020).

Cette vidéo décrit un test in vitro visant à déterminer l’hémolyse induite par l’ionophore de calcium ou la lyse des globules rouges dans un échantillon humain. Le dosage mesure le pourcentage d’hémolyse en quantifiant l’hémoglobine libérée par les érythrocytes rompus.

Protocole

Toutes les procédures impliquant des participants humains ont été effectuées conformément aux directives institutionnelles, nationales et internationales en matière de bien-être humain et ont été examinées par le comité d’examen institutionnel local.

1. Isolement des érythrocytes à partir du sang total

1. Ajouter 500 μL de sang total dans du citrate acide dextrose (ACD) (stocké à 4 °C) dans un tube de microcentrifugation.
   note: Le sang total a été acheté dans l’ACD. Selon la société, 1,5 ml de DCA est ajouté à 7 ml de sang total (volume total de 8,5 ml).
2. Centrifuger le sang entier à 700 x g

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Plaque 96 puits	Fisher Scientific	12-565-331
CaCl2	Fisher Scientific	C79-500
Centrifugeuse	Millipore Sigma	M7157	Modèle Eppendorf 5415C
DMSO	Sigma-Aldrich	472301-100ML
Glucose monohydraté	Sigma-Aldrich	Y0001745
HEPES Buffer (1 M)	Fisher Scientific	50-751-7290	Magasin au 4 ° ; C
Ionomycine sel de calcium	EMD Milipore Corp.	407952-1MG	Dissoudre dans le DMSO pour atteindre 2 mM. Conserver à -20 ° ; C
KCl	Fisher Scientific  ;	P330-500
MgSO4	Fisher Scientific	M65-500
Tube à centrifuger	Fisher Scientific	02-681-5
NaCl  ;	Fisher Scientific  ;	S271-500
Synergy HFM lecteur de microplaques	BioTek
Sang total dans ACD	Zen-Bio		Store à 4 ° ; C et chaud à 37 ° ; C avant l’utilisation