REMARQUE : La ligne de laboratoire standard Oregon R a été utilisée comme témoin WT. Toutes les mouches ont été élevées sur un milieu standard de semoule de maïs et de mélasse (contenant de la mélasse, de l’agar, de la levure, de la semoule de maïs, du tégosept, de l’acide propionique et de l’eau) à température ambiante avec un rythme circadien clair/foncé de 12/12 h.
1. Préparation du test
- Prélever des mouches femelles (âgées de 0 à 2 jours, non vierges) sous anesthésie au CO2 et leur permettre de récupérer avec de la semoule de maïs standard pendant au moins 3 jours avant les expériences.
- Affamer les mouches pendant ~24 h à température ambiante (~23 °C) dans des flacons contenant une lingette de laboratoire imbibée de ~2 mL d’eau déminéralisée.
- Préparez la nourriture contre les mouches avec du bleu de bromophénol (BPB) comme suit :
- Faites fondre la nourriture pour mouches au micro-ondes, puis laissez-la refroidir jusqu’à ce qu’elle soit tiède.
- Ajouter 1 mL de BPB à 4 % à 1 mL d’aliments tièdes et bien mélanger.
- À l’aide d’une pipette, ajoutez la nourriture pour mouches contenant du BPB en un seul point (~200 μL) au centre d’une boîte de Pétri.
2. Essai de surveillance de l’acidification intestinale
- Transférez les mouches affamées dans une boîte de Pétri contenant des points uniques (200 μL) de nourriture pour mouches complétée par 2 % de bleu de bromophénol (BPB). Laissez les mouches se nourrir pendant 4 h à température ambiante pendant qu’elles sont exposées à la lumière.
- Après 4 h, récupérez les mouches et anesthésiez-les sur de la glace ; isolez chirurgicalement leurs intestins.
- Effectuez l’opération dans 1 solution saline tamponnée au phosphate (PBS) avec une pince sous un stéréomicroscope (voir le tableau des matériaux). Isolez l’intestin en tenant le thorax à l’aide d’une paire de pinces et en tirant vers le bas l’abdomen avec une deuxième paire jusqu’à ce que le CCR de l’intestin soit visible, en prenant soin de s’assurer que l’intestin reste attaché aux deux extrémités.
- Déterminez l’acidification de l’intestin en examinant la couleur du CCR de l’intestin (Figure 1C ; le jaune indique qu’il est acidifié et le bleu indique qu’il n’est pas acidifié).
- Ne comptez que les mouches qui présentent une forte coloration BPB dans leurs intestins.
- Calculez le pourcentage à l’aide de l’équation suivante :
Pourcentage de mouches avec des intestins acidifiés = nombre de mouches acidifiées × 100 / (nombre de mouches acidifiées + nombre de mouches non acidifiées)
note: Un pourcentage de 0 indique qu’aucune mouche n’a acidifié son intestin, tandis qu’un pourcentage de 100 indique que toutes les mouches ont acidifié son intestin.
