Dosage des plaies pour évaluer la capacité migratoire des myoblastes murins en co-culture

Résumé

Source : Toubat, O. et al., Modeling Paracrine Noncanonical Wnt Signaling In Vitro. J. Vis. Exp. (2021).

Cette vidéo décrit un test de cicatrisation des plaies en co-culture sans contact pour évaluer la capacité migratoire des myoblastes murins. Cela aide à comprendre les composantes d’envoi et de réception du signal des interactions de signalisation Wnt paracrine non canoniques in vitro.

Protocole

1. Dosage des plaies :

(La figure 1 présente le modèle schématique du test)

1. Laissez les inserts de cellules O9-1 et les puits de la chambre cellulaire C2C12 adhérer et proliférer dans l’incubateur jusqu’à ce que les deux cellules soient à ~70-80 % de confluence avant de procéder à cette partie du protocole. Si les cellules se développent à > 90 % confluentes, ne procédez pas au test de grattage, car les cellules se détacheront simplement du puits.
2. Réchauffez 1x PBS et C2C12 medium en les plaçant dans un bain-marie à 37 °C.
3. Retirez bien le milieu surnageant de la chambre C2C12 et lavez les cel....

Résultats

Figure 1 : Modèle schématique du test.L’étape 1 comprend l’expansion in vitro des myoblastes C2C12 et des NCC à l’aide de cellules nourricières STO. L’étape 2 implique l’enrobage des cellules NCC et C2C12 dans le système de coculture. L’étape 3 comprend le test de plaie effectué dans les cellules C2C12 sous-jacentes pour évaluer la capacité migratoire cellulaire. L’étape 4 implique l’.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
C2C12 lignée cellulaire de myoblastes murins	ATCC	CRL-1772
Système de glissière à chambre, 4 puits	ThermoFisher Scientific	154526
Moyen d’aigle modifié (DMEM) de Dulbecco, teneur élevée en glucose (4,5 g/L), lglutamine (2 mM)	Corning	10-017-CV	Stocké à 4 °C
Pointes de pipette graduées et stériles, 10 μL	Scientifique américain	Référence 1111-3810
Lignée cellulaire de la crête neurale O9-1	Millipore Sigma	SCC049
Solution saline tampon phosphate (PBS), 1x, sans calcium ni magnésium, pH 7,4	Corning	Référence 21-040-CV	Stocké à 4 °C
Support perméable Falcon pour plaque à 24 puits avec membrane PET transparente de 0,4 μM	Corning	353095
Sérum fœtal bovin	Fisher Scientific	Réf. W3381E	Stocké dans des aliquotes de 50 mL à -20 °C
Microscope optique inversé Zeiss Axio Vert.A1	Carl Zeiss AG
Logiciel de microscopie Zen lite 2012	Carl Zeiss AG		Logiciel d’imagerie