Test de rapporteur basé sur ELISA pour étudier l’interaction récepteur-ligand dans les cellules BW

Dans cet article

Résumé

Source : Elias, S. et al., Un système rapporteur BW pour l’étude des interactions récepteur-ligand. J. Vis. Exp. (2019)

Cette vidéo montre la détection de l’interaction récepteur-ligand basée sur le dosage du rapporteur. L’interaction récepteur-ligand réussie active la voie de signalisation en aval, provoquant la génération et la libération de cytokines en tant que molécules rapporteures sécrétoires dans la solution, ce qui est confirmé par ELISA.

Protocole

1. Génération d’un plasmide qui exprime la construction chimérique

REMARQUE : L’objectif est de générer un plasmide qui exprime le domaine extracellulaire du récepteur d’intérêt fusionné aux domaines transmembranaire et intracellulaire de la chaîne CD3ζ de la souris (Figure 1A).

Récupérer la séquence du domaine extracellulaire du récepteur d’intérêt incluant le peptide signal. Obtenir du matériel d’ADN qui devrait exprimer ce récepteur (p. ex., de l’ADNc ou un plasmide).
Obtenir du matériel d’ADN qui exprime les domaines transmembranaire et intracellulaire de ....

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Résultats

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Figure 1 : La structure du récepteur chimérique CD3ζ et la conception des amorces de PCR. (A) Structure générale d’un récepteur extracellulaire fusionné aux domaines transmembranaire et intracellulaire de CD3ζ de souris. (B) Le domaine extracellulaire du récepteur a été amplifié avec une amorce 3' qui comprenait également des nucléotides de CD3ζ. (C) Les domaines intracellulaire et transmembra.......