Quantification de la formation de volants membranaires à l’aide de la microscopie électronique à balayage

Abstract

Source : Ahn, W. et al., Visualisation de la formation de volants membranaires à l’aide de la microscopie électronique à balayage.J. Vis. Exp. (2021)

Cette vidéo montre la préparation d’échantillons, la fixation et l’imagerie d’une cellule de macrophage qui présente des volants membranaires à l’aide de la microscopie électronique à balayage, MEB. Des informations détaillées sur la morphologie et l’organisation des membranes sont cruciales pour comprendre l’état physiologique des cellules.

Protocol

1. Lignée cellulaire et culture cellulaire

1. Cultivez des macrophages RAW 264.7 dans le milieu Modified Eagle Medium (DMEM) de Dulbecco complété par 10 % (vol/vol) de sérum de veau fœtal inactivé par la chaleur (FBS), 100 UI/mL de pénicilline et 100 μg/mL de streptomycine dans un incubateur humidifié à 37 °C et 5 % de CO₂. Remplacez le milieu de culture tous les deux jours.
2. Lorsque les cellules deviennent confluentes à 80 %, lavez la plaque deux fois avec du PBS stérile.
3. Détachez les cellules en ajoutant 1 000 μL de trypsine-EDTA à 0,5 % et incubez la plaque de culture cellulaire pendant 3 à 5 minutes dans un i....

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
0,5 % trypsine-EDTA	Gibco	Référence 15400-054
2 % de glutaraldéhyde	Sciences de la microscopie électronique	Référence 16320
4 % Paraformaldéhyde	Biotechnologie de Santa Cruz	281692
5-(N-éthyl-N-isopropyl)-amiloride	Sigma Sciences de la Vie	A3085
Languettes adhésives en carbone	Sciences de la microscopie électronique	Référence 77825-09
Sulfoxyde de diméthyle	Corning	25-950-CQC
Aigle modifié de Dulbecco Medium	Cytiva Sciences de la vie	SH30022.01
Falcon Plaque de culture cellulaire multipuits à fond plat transparent à fond plat traitée TC	Faucon	353047
Sérum fœtal bovin	Biographie des Gémeaux	900 à 108
Incubateur CO2 HERAcell 150i	Thermo Fisher Scientific	51026282
Hummer Model 6.2 Coucheuse par pulvérisation cathodique	Anatech États-Unis	Référence 58565
JSM-IT500HR microscope électronique à balayage
Verre de protection de microscope	Thermo Fisher Scientific	Tél. : 12-545-82
Streptocoque de stylo	Gibco	Référence 15140-122
Phorbol 12-myristate 13-acétate	Millipore Sigma	Référence 524400
RAW 264.7 macrophage	ATCC	ATCC TIB-71
M-CSF humain recombinant	Peprotech	300-25
Samdri-790 Sécheur à point critique	Société de recherche Tousimis	Référence 8778B
Supports d’échantillons en aluminium MEB	Sciences de la microscopie électronique	Référence 75220
Cacodylate de sodium	Sciences de la microscopie électronique	Référence 12300
Trypan Blue Solution	Thermo Fisher Scientific	15250061